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Le seguenti MAPmates™ non possono essere dosate insieme: -MAPmates™ che richiedono tamponi differenti per l'analisi. -MAPmate™ fosfo-specifiche e totali, es GSK3β totale e GSK3β (Ser 9). -MAPmates™ PanTyr e sito-specifiche come fosfo-recettore EGF e fosfo-STAT1 (Tyr701). -Più di 1 fosfo-MAPmate™ per un solo bersaglio (Akt, STAT3). -GAPDH e β-Tubulina non possono essere miscelati con kit o MAPmates™ contenenti panTyr.
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Kit selezionato
Qtà
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96-Well Plate
Qtà
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Aggiungi altri reagenti (Le microsfere MAPmate devono essere utilizzate con un tampone ed un kit di rilevazione)
Qtà
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48-602MAG
Buffer Detection Kit for Magnetic Beads
1 Kit
Opzione salva-spazio I Clienti che ordinano diversi kit possono scegliere di ridurre lo spazio necessario per lo stoccaggio, rinunciando al confezionamento del kit e ricevendo i vari reagenti per il saggio multiplex in buste di plastica.
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PANSORBIN® Cells, Lyophilized: MSDS (material safety data sheet) o SDS, certificato d’analisi (CoA) e certificato di qualità (CoQ), dossier, brochure e altri documenti disponibili.
Note that this data sheet is not lot-specific and is representative of the current specifications for this product. Please consult the vial label and the certificate of analysis for information on specific lots. Also note that shipping conditions may differ from storage conditions.
Revision
01-June-2009 JSW
Description
Formalin-fixed and heat-killed Staphylococcus aureus cells bearing protein A that bind to the Fc portion of human IgG subclasses 1, 2, and 4, and to IgG from other species (binding capacity: ≥2 mg human IgG/100 mg cells). Used for many purposes, including radioimmunoassays, enzyme immunoassays, agglutination, and immunoprecipitation of antigens. PANSORBIN® also stimulates B-lymphocyte production and inhibits neoplasm growth. Lyophilized from preparations of Cat. No. 507858. Note: size of 5 g or 1 g refers to the wet cell weight.
Form
Lyophilized
Formulation
Lyophilized from PBS, 0.1% NaN₃.
Intert gas (Yes/No)
Packaged under inert gas
Recommended reaction conditions
The procedures used for performing immunoprecipitations using PANSORBIN® cells are somewhat variable, but this protocol can serve as a general guideline.
PANSORBIN® cells work best when the antibody is human (IgG1, IgG2, IgG4), rabbit IgG (all isotypes), or mouse (IgG2a, IgG2b, IgG3).
Prewashing:
1. Transfer desired amount of PANSORBIN® cells to a microfuge tube (typically 10-30 µl of a 10% PANSORBIN® cell suspension per immunoprecipitation).
2. Centrifuge at 3000 x g for 5 min, or at maximum speed in a microfuge for 1 min at 4°C.
3. Aspirate the supernatant.
4. Resuspend to the original volume or in 1.0 ml of cold lysis buffer, whichever is greater. Mix gently.
5. Repeat wash (steps 2-4).
6. Resuspend the final pellet to the original volume (from step 1) in lysis buffer.
7. If kept sterile, washed PANSORBIN® cells are stable at 4°C.
Pre-Clearing (Optional):
Pre-clearing with PANSORBIN® cells prior to immunoprecipitation removes material that binds nonspecifically, reducing the background.
1. Add 10-30 µl of washed PANSORBIN® cells to the lysate prior to incubation with the primary antibody.
2. Incubate for 1 h on ice, mixing occasionally.
3. Centrifuge at 3000 x g for 5 min, or at maximum speed in a microfuge for 1 min at 4°C.
4. Transfer the supernatant to another microfuge tube and discard the pellet. Alternatively, the lysate can be pre-cleared with PANSORBIN® cells which have been pre-bound to nonspecific antiserum (see Secondary Antibody pre-binding procedure).
Primary Antibody:
1. Add the required amount of primary antibody to the lysate.
2. Incubate for at least 1 h on ice, mixing occasionally.
3. If a secondary antibody step is not required or desired, proceed to the PANSORBIN® Step described below.
Secondary Antibody:
In some cases, a secondary antibody will be necessary. For example, if the primary antibody is mouse IgG1, it is best to use a rabbit anti-mouse IgG as a secondary antibody. If desired, the secondary antibody can be pre-bound to the PANSORBIN® cells to eliminate the loss of antibody-antigen complexes which have not bound to the protein A.
1. Incubate the desired amount of secondary antibody with prewashed PANSORBIN® cells for 45-60 min on ice.
2. Centrifuge at 3000 x g for 5 min, or at maximum speed in a microfuge for 1 min at 4°C.
3. Aspirate the supernatant and wash the lysis buffer.
4. Resuspend in lysis buffer to a volume equal to the original volume of PANSORBIN® cells which were added.
Alternatively, the unbound secondary antibody and PANSORBIN® cells can be incubated with the sample sequentially, following primary antibody incubation.
PANSORBIN® Step:
1. Add at least 10X the amount of PANSORBIN® cells (alone or bound to secondary antibody) needed to precipitate the primary (or secondary) antibody. PANSORBIN® cells bind about 2 mg of human IgG/ml. Typically, add 10-30 µl of PANSORBIN® cells per immunoprecipitation.
This quantity gives a visible pellet.
2. Incubate for 1-2 h on ice, mixing regularly.
3. Centrifuge at 3000 x g for 5 min, or at maximum speed in a microfuge for 1 min at 4°C.
4. Wash PANSORBIN® pellet 2-3 times with lysis buffer.
5. If samples are to be loaded onto a polyacrylamide gel, the PANSORBIN® pellet can be resuspended in sample buffer, boiled for 10 min, centrifuged quickly (30 s in a microfuge at 20°C). Load the supernatant onto the gel. If a high background is observed, it may be necessary to pre-clear lysates, prebind the antibody to PANSORBIN® cells, or use a stronger lysis buffer (e.g. RIPA). This protocol is meant to serve as a guideline and may need to be modified for specific applications.
Solubility
Reconstitution with 10 ml sterile dH₂O yields a 10% (w/v) cell suspension.
Storage
+2°C to +8°C
Do Not Freeze
Ok to freeze
Special Instructions
Following reconstitution, aliquot and refrigerate (4°C). Stock solutions are stable for up to 1 month at 4°C.
Toxicity
Standard Handling
References
Kierszenbaum, F., et al. 1991. Immunology74, 317. Meikle, P.J., et al. 1991. J. Biol. Chem.266, 22569. Ezaki, O., et al. 1989. Biochem. Biophys. Res. Commun.159, 1368. Murakami, H., et al. 1988. Biochem. J.256, 917. Kessler, S.W. 1975. J. Immunol.115, 1617.
