Kit de purificación de anticuerpos Montage®
Designed for fast and easy antibody purification from serum, ascites or cell culture supernatants.
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Referencias bibliográficas
| Visión general referencias |
|---|
| Antibody Purification with Affinity Spin Columns Kavonian, Mark,BioScience Technology, July 2003 BioScience Technology, July 2003 2003 |
| Considerations During Development of a Protein A-Based Antibody Purification Process Iyer et al.,Biopharm, January 2002, pp 14-20 Biopharm, January 2002, pp 14-20 2002 |
| A sensitive enzyme linked immunoadsorbent assay (ELISA) for the detection of staphylococcal prtein A (SpA) present as a trace contaminant of murine immunoglobulins purified on immobilized protein A Miguel A.J. Godfrey, Piotr Kwasowski, Roland Clift and Vincent Marks Journal of Immunological Methods, 149(1992) 21-27, 1992 1992 |
Preguntas frecuentes
| Pregunta | Respuesta |
|---|---|
| My Buffer A Solution from my Montage Antibody Purification Kit Prosep A (or Prosep G) has turned slightly yellow. I know the shelf life of the kit is 2 years but is this solution ok to use? | Yes, this slight change in color will not affect the activity of the Buffer A Solution. |
| Can the antibody purification with the Montage Antibody Purification Prosep A/G columns be done with gravimetric flow instead of centrifugation? | No. There is not enough force to run via gravimetric flow. These devices designed for centrifugation. |
| What is the best way to store the Prosep plugs for a couple of months? | The Prosep columns are transported in 20% ethanol. In order to keep the plugs for several months, it is better to take them out from the spin column using the insertion tool and keep them in a container with 20% ethanol. If the customer prefers azide, it will be OK too. |
| What is the shelf life of the Prosep A and Prosep G spin columns? | The spin columns/media are under warranty for 2 years provided they are stored at 2-8 C. |
| Do I need to filter the buffers provided with the Montage Antibody Purification kit? | The buffers supplied with the kit are pre-filtered for immediate use. |
| Do I need to pre-filter my sample before loading it onto a Prosep A or ProSep G spin column? | All samples must be filtered through a 0.22 mm filter immediately before loading the sample onto the column. We recommend using a Steriflip-GP 0.22 mm filter. |
| What is the binding capacity of the Prosep A spin column? | Using the Prosep A spin columns we have been able to bind >20 mg of Rabbit IgG. |
| What is the maximum volume I can load onto the Prosep A and Prosep G spin columns? | You can load up to 20 ml in a Prosep A or Prosep G sping column for a swinging bucket rotor and up to 10 ml for a fixed angle rotor. We recommend that you spin it in a swinging bucket rotor. |
| Why do you suggest that the Prosep A spin columns be spun at 100-150 xg for 20 minutes? | The low speed, twenty minute centrifugation maximizes IgG / resin contact which increases IgG binding efficiency. |
| Can I use a fixed angle rotor or a swinging bucket rotor with the Prosep A and Prosep G spin columns? | Swing bucket rotors are recommended because they provide uniform flow through the resin. For optimal performance with a fixed angle rotor, ensure that the orientation of the Prosep A spin coulmn is the same for all steps. Also please note that the maximum sample loading volume for a fixed angle rotor is ten ml versus twenty ml with a swinging bucket rotor. |
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Categorías
Los kits Montage de purificación de anticuerpos están diseñados para la purificación rápida y sencilla de anticuerpos en suero, ascites o sobrenadantes de cultivos celulares. Los kits incluyen columnas para centrífuga precargadas con medio cromatográfico PROSEP-A o G High Capacity. No hay que usar ninguna bomba. No hay que cargar ninguna columna. Todo lo que necesita es una centrífuga para purificar 10–20 mg en menos de 60 minutos.
El protocolo es fácil de seguir y, a diferencia de los métodos tradicionales de flujo por gravedad, el uso de purificación por centrífuga es mucho más conveniente.
Los resultados demuestran que las columnas para centrífuga pueden regenerarse hasta 10 veces sin perder ninguna capacidad de adsorción ni disminuir la especificidad.
Rendimiento
Reutilización de la columna para centrífuga
)
Se purificó IgG humana 10 veces en suero normal utilizando una columna para centrífuga PROSEP-G regenerada.
Purificación de MAbs
)
Se purificó IgG monoclonal de ratón en ascites con una columna PROSEP-A para centrífuga. (Línea 1: ascites no purificado. Línea 2: ascites fluyendo. Línea 3: lavado. Línea 4: 5 µg de anticuerpo purificado). Cortesía de Exalpha Biologicals.
| Afinidades de unión de la proteína A y la proteína G | ||||||
| Proteína | A | G | Proteína | A | G | |
| IgG1 humana | ++ | ++ | IgM de rata | + /-- | - | |
| IgG2 humana | ++ | ++ | IgG de conejo | ++ | ++ | |
| IgG3 humana | -- | ++ | IgG de hámster | + | ++ | |
| IgG4 humana | ++ | ++ | IgG de conejillo de India | ++ | + | |
| IgA humana | + | -- | IgG bovino | + | + | |
| IgD humana | + | -- | IgG de oveja | + / -- | + | |
| IgE humana | + | -- | IgG de cabra | + /-- | + | |
| IgM humana | + | -- | IgG de cerdo | ++ | ++ | |
| IgG1 de ratón | + | + | IgG de pollo | -- | + /-- | |
| IgG2a de ratón | ++ | ++ | Fragmentos | |||
| IgG2b de ratón | ++ | ++ | Fab humano | + | + | |
| IgG3 de ratón | + | ++ | F(ab')2 humano | + | + /-- | |
| IgM de ratón | + /-- | -- | ScFv humano | + | -- | |
| IgG de rata | ++ | ++ | Fc humano | + | -- | |
| IgG1 de rata | + /-- | + | K humana | -- | -- | |
| IgG2a de rata | + /-- | ++ | Humana | -- | + | |
| IgG2b de rata | + /-- | + | ||||
| IgG2c de rata | + /-- | + | ||||
| Leyenda: ++ = Afinidad fuerte; + = Afinidad ligera/moderada; +/-- = Requiere evaluación; -- = Ninguna afinidad | ||||||
| Contenido del kit | Incluye columnas para centrífuga, tampones, dispositivos para concentración y preparación de muestras | |
| Material de soporte de la matriz | Vidrio poroso | |
| Tamaño de las partículas de medio, µm | 75 µm–125 µm | |
| Volumen del lecho de medio, µl | 1.6 mL | |
| Capacidad de adsorción | ||
| Proteína A | >20 mg de IgG de conejo | |
| Proteína G | >10 mg de IgG de conejo | |
| Rango de pH | pH2 – pH9 | |
| Volumen máximo, ml | 20 mL (maximum in swinging bucket rotor) | |
| Temperatura de almacenamiento | ||
| Terminales codificados por colores | ||
| Proteína A | Rojo | |
| Proteína G | Amarillo | |