ANTI-TAU (MAPT) Antibody

5バンド（52–68 kDa）

タウは、成長中の軸索で微小管を安定化させる働きをする微小管結合タンパク質であり、対らせんフィラメント（PHF）で高リン酸化することが分かっています。PHFは、アルツハイマー病と関連のある神経原線維病変の主要な線維性成分です。タウの高リン酸化は、PHFの凝集につながる重大な事象と考えられています。6種のタウタンパク質アイソフォームが特定されており、これらの全てがグリコーゲン合成酵素キナーゼ3（GSK 3）によってリン酸化されます。細胞局在と細胞内局在：抗タウ-1自体は、ニューロンの軸索に対する厳格な特異性を有します。この抗体は、ニューロンの細胞体および樹状突起を染色しません。また、他の細胞タイプも染色しません(4)。ただし、培養物では、このin vivoの細胞内特異性は維持されません。例えば、抗タウ-1は培養物で増殖したラット海馬ニューロンの軸索、細胞体、および樹状突起を染色します(5)。抗タウ-1の特異性は元来、軸索に対するタウの限定的な発現を示すものと考えられていました。後の研究により、この特異性はリン酸化の状態に依存することが分かっています。脱リン酸化したサンプル（アルカリホスファターゼで処理したサンプル）においては、抗タウ-1は星状膠細胞、ニューロン周囲グリア細胞、およびニューロンの軸索、細胞体、樹状突起を染色しますが、未処理のサンプルでは抗タウ-1は軸索のみを染色します(6)。（抗タウ-1によって認識されるエピトープは、おそらくリン酸化部位またはその周辺にあります。）

精製された変性ウシ微小管関連タンパク質

ウェスタンブロッティング：凝集と分解の2つのサイクルで精製されたウシ脳微小管タンパク質(9)を、SDS-PAGEサンプルバッファーで溶解します。1レーンあたり5マイクログラムの微小管調製液を、分子量マーカー（14.3～200 kD）とともに4%～20%のSDS-PAGE勾配ゲルにロードします。電気泳動による分離後に、タンパク質をニトロセルロースにブロットします。タウは、約5 ng/mLの抗タウ1によって一連の5つのバンド（52～68 kD）として検出されます。

免疫蛍光染色：希釈倍率1:1000で使用、マウス初代神経細胞のタウを検出できます。(Basnet, N., et al. (2018).Nat. Cell Biol. 20(10); 1172-1180.）。

免疫組織染色：5 μg/mL。組織においては主に軸索を染色しますが、培養物のタウ発現は軸索のみに限定されません。

最適な希釈濃度は、ご自身で決定してください。

免疫組織染色プロトコル

組織切片の脱リン酸化（オプション）

アルツハイマー脳組織の神経原線維変化を抗タウ-1で染色する場合は、アルカリホスファターゼによる脱リン酸化が推奨されます(6)。この処理により抗タウ-1の染色パターンが変化し、ニューロンの細胞体、樹状突起、および軸索が含まれるようになります。未処理のサンプルでは、抗タウ-1は軸索のみを染色します。

1.次の溶液中で常に撹拌しながら、組織切片を+32°Cで2.5時間インキュベートします：100 mM Tris-HCl、pH 8.0；130 units/mLアルカリホスファターゼ, 1 mM PMSF、10 μg/mLペプスタチンおよび10 μg/mLロイペプチン。

2.100 mM Tris-HCl、pH 8.0による3分間の切片洗浄を2回行います。

抗タウ-1染色

1.1%（v/v）正常動物血清、および0.03%（w/v）Triton X-100を含むPBS中で切片をインキュベートすることにより、非特異的結合を阻害します。動物血清は、二次抗体と同じ種に由来するものでなければなりません。

2.PBSによる3分間洗浄を3回繰り返します。

3.1%（v/v）正常動物血清を含むPBSで希釈した約5 μg/mLの抗タウ-1で切片をインキュベートします。

4.3分間にPBSを3回交換して洗浄します。

5.標準の二次抗体検出システムで検出を行います(10-13)。

抗タウ-1抗体、クローンPC1C6は、IHおよびWBで使用するためのタウ-1に対する抗体であり、製品は65件以上引用されています。

研究のカテゴリ
神経科学

研究のサブカテゴリ
神経変性疾患

抗Tau1抗体、クローンPC1C6は、ヒト、ラット、ウシ脳におけるタウのすべての既知電気泳動種と結合します（一次元SDS-PAGE）。ただし、クローンPC1C6は、195、198、199、および202で脱リン酸化したセリン部位のみを認識すると見られるため、非リン酸化に関する若干の偏りがあります {Szendrei, et al 1993; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi-cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=7680727}。また、PC1C6に関する詳細なマッピング情報については、Billingsley & Kincaid, 1997 Biochem J 323:577-591を参照してください。

0.02 Mリン酸バッファー、pH 7.6、0.25 M NaCl、および0.1%アジ化ナトリウム

フォーマット：精製

精製プロテインA

-20°Cで出荷日から1年間保存できます。凍結融解を繰り返さないために、分注してください。製品を最大限回収するために、融解後のキャップを外す前に元のバイアルを遠心分離します。

コントロール
アルツハイマー脳組織（アルツハイマー脳組織の神経原線維変化を染色する場合は、アルカリホスファターゼによる脱リン酸化が推奨されます）またはヒトT98G神経膠芽腫細胞

濃度：ロットに固有の濃度につきましては試験成績書をご参照ください。

先発品：AB1512

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

メルクのカタログまたは製品に添付されたメルクのその他の文書に記載されていない場合、メルクの製品は研究用途のみを目的としているため、他のいかなる目的にも使用することはできません。このような目的としては、未承認の商業用途、in vitroの診断用途、ex vivoあるいはin vivoの治療用途、またはヒトあるいは動物へのあらゆる種類の消費あるいは適用などがありますが、これらに限定されません。