コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

コラゲナーゼは、終末糖化産物(AGE)研究のための動脈組織の調製に使用されています。この酵素は、その他のプロテアーゼと共に、ヒト腫瘍、マウス腎臓、ヒトの脳、肺上皮およびその他多くの組織の脱凝集にも使用されています。また、肝臓と腎臓の潅流研究、膵臓の消化、および非実質肝細胞の単離にも有効です。また、ラットの精巣上体脂肪体からの脂肪細胞の調製にも適しています。

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

組織から細胞を効果的に放出するには、コラケナーゼ酵素と中性プロテアーゼの両方が作用する必要があります。コラゲナーゼは、酵素1モル当たり4グラム原子のカルシウム(Ca²⁺)によって活性化されます。培養ろ液は、分子量が68～130 kDaの範囲である少なくとも7種の異なるプロテアーゼを含むと考えられます(最適pH：6.3～8.8)。本酵素は、配列-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-を認識し、ほとんどの場合、Xは中性アミノ酸です。

本製品は、Clostridium histolyticum由来のタイプII（C6885）コラゲナーゼから調製されています。 溶液は通常、TESCAバッファーにより1～2 mg/mLで調製されます（50 mM TES、0.36 mM塩化カルシウムを含む、37℃でpH 7.4）。また、本製品はクロストリパイン、非特異的中性プロテアーゼおよびトリプシン活性を含みます。

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

供給時点でのこの製品は-20℃で1年間安定です。37℃、50℃および-20℃では、30日間でFALGPAまたはプロテアーゼ活性が減少することはありません。粗コラゲナーゼ溶液は、アリコット(10 mg/mL)で急速凍結し、-20℃で凍結維持すれば安定です。さらに凍結・融解サイクルを繰り返すと、溶液が損傷を受けます。 この製品は、氷上に保つと100%の活性を7時間にわたって保持します。