コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

Clostridium histolyticum由来のコラゲナーゼは、2つのクラスのコラゲナーゼで構成されており、コラーゲンの三重らせん内の複数の切断部位でコラーゲンを切断します。これは哺乳類のコラゲナーゼよりも効果的です。クロストリジウムのコラゲナーゼは、ガス壊疽の細菌侵入に関与しています。

コラゲナーゼは、終末糖化産物(AGE)研究のための動脈組織の調製に使用されています。この酵素は、その他のプロテアーゼと共に、ヒト腫瘍、マウス腎臓、ヒトの脳、肺上皮およびその他多くの組織の脱凝集にも使用されています。また、肝臓と腎臓の潅流研究、膵臓の消化、および非実質肝細胞の単離にも有効です。この酵素の肝細胞放出適合性を試験する場合。コラゲナーゼは、各ラット肝臓に対して全量100 mL中約1 mg/mLで使用します。

Clostridium histolyticum由来のコラゲナーゼは、脾臓や精巣組織などの組織試料を解離させるために使用されています。

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

組織から細胞を効果的に放出するには、コラケナーゼ酵素と中性プロテアーゼの両方が作用する必要があります。コラゲナーゼは、酵素1モル当たり4グラム原子のカルシウム(Ca²⁺)によって活性化されます。培養ろ液は、分子量が68～130 kDaの範囲である少なくとも7種の異なるプロテアーゼを含むと考えられます(最適pH：6.3～8.8)。この酵素の代表的な用途は、組織試料内の結合成分を消化して個々の細胞に遊離することです。コラゲナーゼ処理によっていくつかの細胞が死ぬことがあります。消化に使用する濃度は一般に0.1～5 mg/mLの間で変動します。反応継続時間は15分～数時間の間で変動し、必要以上の細胞死を招くことなく効率的な細胞解離を可能にします。カルシウム、BSAと共にクレブス・リンゲル緩衝液を使用するのが好ましく、その活性にはZn²⁺が必要です。

タイプIV(C5138)から調製。原液は、0.05～0.1 mg/mLのコラゲナーゼを、0.36 mM塩化カルシウムを含有した50 mM TES緩衝液(TESCA) (pH 7.4)に37°Cで溶解することによって調製できます。この製品は、クロストリパイン、非特異的中性プロテアーゼ、およびトリプシンの活性も含みます。

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

供給時点でのこの製品は-20°Cで1年間安定です。37°C、50°Cおよび-20°Cでは、30日間でFALGPAまたはプロテアーゼ活性が減少することはありません。粗コラゲナーゼ溶液は、アリコット(10 mg/mL)で急速凍結し、-20°Cで凍結維持すれば安定です。さらに凍結・融解サイクルを繰り返すと、溶液が損傷を受けます。 この製品は、氷上に保つと100%の活性を7時間にわたって保持します。