コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

Clostridium histolyticum由来コラゲナーゼは、コラゲナーゼ結合ドメイン（CBD）および多発性嚢胞腎（PKD）様ドメインを有しています。コラゲナーゼは、カルシウムと結合するためのCa²⁺結合部位も有しており、カルシウムとの結合は本酵素の機能にとって極めて重要です。コラゲナーゼは、結合組織障害であるデュピュイトラン拘縮の管理に用いられます。

本製品は、ヒト腫瘍、マウス腎臓、ヒト成体および胎児脳、肺、ならびに他の上皮組織の凝集防止に適しています。 また、肝臓および腎臓の灌流実験、膵臓の消化、ラットの肝臓の非実質細胞の分離、ならびに肝細胞の調製においても効果的であることが示されています。 コラゲナーゼはまた、終端糖化産物の研究のための動脈組織の調製にも使用されています。 本酵素は、肝細胞の遊離のために約1 mg/mLの濃度でテストされています。 消化に使用する濃度の幅は、0.1～5 mg/mLです。

Clostridium histolyticum由来コラゲナーゼは、下記の試料の消化に使用されています：

• 膵島の単離のための膵臓試料
• 肺血管平滑筋細胞（PVSMC）の単離のための肺血試料
• 軟骨細胞の単離のための軟骨試料

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

コラゲナーゼ製品は、C. histolyticumによって分泌される酵素の混合物であり、分泌された酵素中に存在する 10～18 の成分の相対比率によって区別される異なる製品があります。 主な成分は、2 種類のコラゲナーゼ、クロストリパイン、および中性プロテアーゼです。 これらの酵素の相乗的な作用によって、コラーゲンや他の細胞内物質が分解されます。2 種類のコラゲナーゼと中性プロテアーゼの作用は、細胞の組織からの遊離に不可欠です。 様々なタイプのコラーゲンが、コラゲナーゼの天然基質です。

本製品は、Clostridium histolyticum 由来のタイプ XI (C7657) コラゲナーゼから調製されています。本製品はまた、クロストリパイン、非特異的な中性プロテアーゼ、およびトリプシン活性を含んでいます。溶液は通常、37°Cで、50 mM TES、0.36 mM 塩化カルシウムを含む TESCA 緩衝液（pH 7.4）により、1～2 mg/mL の濃度で調製されます。

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

本製品は-20°Cで 1 年間安定です。37°C、50°C、-20°Cで 30 日間、FALGPA またはプロテアーゼ活性の低下はありません。クルードコラゲナーゼ溶液は、（10 mg/mL で）アリコートして素早く冷凍し、-20°Cで保存しても安定です。凍結融解を繰り返すと、溶液は劣化します。 本製品は、氷上で 7 時間以上、活性の 100％を維持します。