トリプシン-EDTA 溶液

この製品の典型的な用途は、接着細胞を培養物表面から除去することです。基質から細胞を除去するために必要なトリプシン濃度は、主に細胞の種類と培養期間に依存します。
トリプシン-EDTA溶液は、次の用途で使用されます：

• 細胞培養物を維持するためのサプリメントとして使用
• コンフルエンスまで増殖した細胞を回収するため
• レンチウイルス形質導入マクロファージを脱離させるため

トリプシンはリジンおよびアルギニン残基のＣ末端側でペプチドを開裂します。 酸性残基が開裂部位のどちらかの側にあるとこの反応の加水分解は遅くなり、プロリン残基が開裂部位のカルボキシル側にあると加水分解は停止します。 トリプシン活性の最適pHは7～9です。 トリプシンは、合成アミノ酸誘導体のエステル結合およびアミド結合も開裂します。 トリプシンが作用するペプチド結合を覆い隠すカルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを中和するキレート剤として、EＤTAをトリプシン溶液に付加します。 これらのイオンを除去することで、酵素活性が増大します。

DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF、アプロチニンなどのセリンプロテアーゼインヒビターはトリプシンを阻害します。

細胞をきわめて高濃度のトリプシンと共に長時間インキュベートすると、細胞膜が損傷し細胞死に至る恐れがあります。 Ca²⁺およびMg²⁺を含まない緩衝塩溶液でトリプシンを溶解するか濃縮溶液から希釈する必要があります。

トリプシンは223個のアミノ酸差残基を持つ一本鎖ポリペプチドで構成されており、Lys - lleペプチド結合を開裂させるトリプシノーゲンからＮ末端ヘキサペプチドを除去することで生成されます。 アミノ酸配列は、6つのジスルフィドブリッジで架橋されています。 これはトリプシン（β-トリプシン）の自然の形態です。 β-トリプシンは自己分解でき、Lys-Ser残基で開裂し、α-トリプシンを生成します。 トリプシンはセリンプロテアーゼファミリーに属します。

この製品は、-10～-40℃で凍結して保存します。凍結と解凍の繰り返しは避ける必要があります。