GCリッチPCRシステムのトラブルシューティング

製品番号12140306001

GCリッチテンプレートのトラブルシューティング

テンプレートの品質はPCRの結果に大きく影響します。
長さ5 kbまでのGCリッチな標的、反復配列を有するDNA、GC含量の異なるDNA混合物の増幅には、GCリッチPCRシステムまたはGCリッチPCRシステムのdNTPackを使用することをお勧めします。GCリッチPCRシステムには、ほとんどのPCRシステムに含まれていない、特別配合の次の3つの構成品が含まれています。
（1）特殊な酵素ミックスと（2）反応バッファー（いずれも界面活性剤とDMSOを含む）、（3）特殊なGCリッチ専用溶液 

最適な反応条件（インキュベーション時間と温度、GCリッチPCRシステム酵素ミックス、GCリッチ専用溶液、テンプレートDNA、Mg²⁺の濃度）は、テンプレート／プライマーのペアによって異なり、アッセイごとに決定する必要があります。難度の高いテンプレートでは、GCリッチ専用溶液の濃度検討が必要になる場合があります（0.5〜2.5 M、0.25 M刻み）。
難度の高いテンプレートを使用してPCRを最適化するには、上記に加えて、次のオプションも検討してください。

• DMSO（v/v）を2〜10%追加します。DMSOの濃度が5%を超えると、DNAポリメラーゼ活性が低下する可能性があることに注意してください。濃度10%のDMSOはDNAポリメラーゼを阻害します。注記：DMSOを追加すると、PCRのエラー率にも悪影響を与える可能性があります。
• 次のような追加のオプションがあります：
  • グリセロールを追加する（5〜25%）
  • ベタインを追加する（0.5〜2 M）
  • 尿素を追加する
• DNAテンプレートがプラスミドの場合は制限酵素を使用して線状化する。