면역 검출 시약 및 기질
웨스턴 블롯팅에서 실험의 성공을 결정하는 가장 중요한 요소는 사용되는 시약의 품질입니다. 시너지 효과를 발휘하도록 사전 최적화된 다양한 웨스턴 블롯 시약을 제공하여 강력한 특이 신호와 낮은 배경을 제공함으로써 출판 수준의 결과를 신속하게 얻을 수 있도록 도와줍니다.
Products
서양 블롯팅용 화학발광 기질
Immobilon® 화학발광 검출용 HRP 기질은 더 많은 정량적 블롯을 위한 향상된 감도를 제공하여 검출에 사용되는 항체의 농도를 낮출 수 있어 비용을 절감할 수 있습니다.즉시 사용 가능한 편리한 2성분 또는 2성분 형식의 다양한 감도를 가진 Immobilon® 기질 포트폴리오 중에서 선택하여 웨스턴 블롯 애플리케이션에 맞게 검출을 최적화할 수 있습니다.
- Immobilon® Classico, Crescendo 및 Forte 화학발광 기질는 다양한 감도로 제공되는 퍼옥시다제 기반 검출을 위한 사전 혼합된 즉시 사용 가능한 시약 제품군으로 구성되어 다양한 표적 단백질 농도에 걸쳐 최적의 신호 대 배경 비율을 제공합니다.검출 한계:
- Immobilon® Classico: ~ 6 pg 의 표적 단백질
- Immobilon® Crescendo:표적 단백질 1~3개
- Immobilon® Forte: ~ 400 fg 표적 단백질
- Immobilon® Western HRP, Immobilon.sup>® ECL Ultra 및 Immobilon® UltraPlus Western 기질은 표준 2성분 포맷에서 탁월한 감도와 긴 신호 수명을 제공합니다. 이러한 제형을 사용하면 면역블롯 검출을 위해 더 희석된 1차 항체 용액을 사용할 수 있습니다. 검출 한계 :
- Immobilon® Western HRP 기질: ~ 400fg 표적 단백질
- Immobilon® ECL Ultra 기질: 낮은 펨토그램 범위
- Immobilon® ECL UltraPlus 웨스턴 블롯 HRP 기질: 낮은 펨토그램 범위
이모빌론® 화학발광 HRP 기질의 상대적 감도
그림 1.4μg 단백질로 시작하는 A431 세포 용해물 [12-110]의 2배 희석 시리즈를 200V에서 25분 동안 10% mPAGE® 겔 [MP10W15]에서 MOPS 버퍼 [MPM0PS]로 실행했습니다. 단백질을 10% 에탄올이 포함된 mPAGE® 전이 버퍼 [MPTRB]에서 1시간 동안 Immobilon®-P 멤브레인 [IPVH00010]으로 전이시켰습니다. 토끼 항-HH3 [H0164] 및 염소 항-토끼 [AP132P] 항체를 나열된 희석 농도로 사용하여 HH3 단백질(15kDa)의 면역 검출을 수행했습니다. 블롯을 표시된 ECL 시약으로 5분간 배양하고 Bio-Rad® ChemiDoc 시스템에서 30초 노출로 이미지를 촬영했습니다.
Cytiva™ 및 Amersham™ ECL 검출 시약은 강화된 루미놀 기반 HRP 검출을 사용하며, 다양한 제형으로 다양한 웨스턴 블롯 응용 분야의 요구를 충족시킬 수 있습니다.
- Cytiva Amersham™ ECL 웨스턴 블롯팅 검출 시약은 확진 웨스턴 블롯팅 애플리케이션에 권장됩니다.
- Cytiva Amersham™ ECL Prime 웨스턴 블롯 검출 시약은 동일한 블롯에서 고농도 및 저농도 단백질을 모두 검출할 수 있습니다.
- Cytiva Amersham™ ECL Select 웨스턴 블롯 검출 시약은 희석된 1차 및 2차 항체를 사용해도 높은 감도를 제공합니다.
- Cytiva Amersham™ ECL Start 웨스턴 블롯팅 검출 시약은 중간 및 고발현 단백질의 화학발광 검출을 위해 개발되었습니다.
서양 블롯팅용 크로모제닉 기질
크로모제닉 검출은 퍼옥시다제(예:, HRP) 또는 알칼리성 포스파타제(AP) 결합 효소를 사용하여 반응을 촉매하여 검출을 위한 불용성 색 침전물을 침착시킵니다. 웨스턴 블롯팅용 발색 기질은 용액, 분말 및 정제 형태로 제공되어 보관 및 사용에 대한 유연한 옵션을 제공합니다.
- SIGMAFAST™ DAB 정제(발색 HRP 기질)은 홀스래디쉬 퍼옥시다아제와 반응하면 갈색을 생성하는 비색 침전 기질로 구성되어 있으며 물에 녹여 바로 사용할 수 있는 블롯 검출용 완충 용액을 준비할 수 있습니다.
- BCIP/NBT(파란색/보라색) 및 BCIP/TNBT(파란색/갈색) 단일 시약(발색성 AP 기질)은 알칼리성 포스파타제에 대한 매우 민감한 비색 기질입니다.
- TMB 강화 단일 성분 HRP 멤브레인 기질(발색성 HRP 기질)은 진한 파란색 제품을 생성하는 단일 성분 비색 기질입니다.
관련 리소스
- Handbook: Protein Blotting Tips and Tricks
This handbook represents the collective experience of our application scientists, who are actively engaged in advancing the science of protein blotting and detection.
- Brochure: Rethink Western Blotting
Explore our products designed to improve each step of the Western blotting workflow.
- Article: Western Blotting Protocol (Immunoblotting Protocol)
Western blot protocol with workflow steps for different blot procedures, describing the electrophoretic transfer of proteins from SDS polyacrylamide gels to sheets of nitrocellulose.