Solución PluriSTEM^® Dispasa-II

Suelen utilizarse enzimas proteolíticas como la tripsina, la colagenasa y la pronasa para dispersar tejidos y células. Estas enzimas, sin embargo, a menudo dañan las células, son inestables durante la incubación, pueden ser heterogéneas y también una fuente de contaminación por micoplasmas. La dispasa-II se utiliza para la preparación de células procedentes de una amplia variedad de tejidos y órganos diferentes. Se ha demostrado que la dispasa-II es un agente rápido y eficaz, aunque suave, para separar muchos tejidos y células cultivadas in vitro. La dispasa es especialmente adecuada para procedimientos de desagregación y subcultivo de tejidos, ya que no daña las membranas celulares.

La Dispasa-II PluriSTEM ha sido validada para trabajar junto con el medio PluriSTEM Human ES/iPS (SCM130) para el cultivo y el pase de células madre embrionarias y pluripotentes inducidas humanas.

La enzima Dispasa-II se produce en Bacillus polymyxa.

Categoría de investigación
Investigación en células madre

El usuario final debe determinar la técnica de paso óptima, que varía según el tipo de célula y las condiciones de cultivo.

1. Cubra las placas de 6 pocillos con 1:20 de revestimiento Matrigel (1,5 ml por pocillo). Incube a 2-8ºC durante la noche o recubra a RT durante al menos 30 minutos a 1 hora antes de usarlo.
2. Retire el revestimiento matrigel. Añada 2 ml de medio completo por pocillo.
3. Elimine las áreas de diferenciación dentro del cultivo.
4. Aspire los medios.
5. Lave una vez con 2 ml de PBS.
6. Añada 1,5 ml de dispasa II por pocillo. Incube a 37ºC durante 7 minutos.
7. Lave dos veces con 2 ml de PBS, sin Mg ni Ca.
8. Añada 2 ml de medio completo a cada pocillo y utilice un raspador celular para separar las colonias.
9. Recoja las células raspadas en un tubo cónico de 15 ml.
10. Centrifugue a 800 rpm durante 5 minutos
11. Vuelva a suspender en el volumen adecuado de medio completo. La relación de separación típica es de 1:5 – 1:6 dependiendo de la densidad celular. Las células deben estar listas para el pase en 5-6 días utilizando el medio PluriSTEM Human ES/iPS.

Subcategoría de investigación
Enzimas y bioquímica

El producto se presenta en DMEMF12 estéril a 1 mg/ml. El producto se filtra a través de un filtro de 0,2 micras antes de congelarlo.
La enzima Dispasa-II se produce en Bacillus polymyxa.

Conservar a -20°C durante un máximo de 4 meses desde de la fecha de recepción. Una vez descongelada, distribuya en alícuotas de volumen de trabajo más pequeño y almacene a -20ºC. Evite varios ciclos de congelación y descongelación para mantener una actividad enzimática adecuada.

La disolución es roja y no hay partículas presentes. La disolución es estéril y adecuada para aplicaciones de cultivo celular.

PLURISTEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Salvo que se indique lo contrario en nuestro catálogo o en otra documentación de la empresa que acompañe al producto, nuestros productos están indicados sólo para investigación y no deben utilizarse para ningún otro propósito, como, entre otros, usos comerciales no autorizados, diagnóstico in vitro, usos terapéuticos ex vivo o in vivo o cualquier tipo de consumo o aplicación en humanos o animales.