抗緑色蛍光タンパク質抗体

GFPの分子量は27 kDaであり、検出される融合タンパク質の分子量に依存します。

クラゲの一種であるオワンクラゲ由来の緑色蛍光タンパク質（GFP）は、生体や固定組織を含むさまざまな細胞系における遺伝子発現をモニタリングするための蛍光標識として用いられています。他の生物発光レポーターとは異なり、GFPは、基質、補因子、または他の内因性もしくは外因性タンパク質の非存在下で蛍光を発します。精製GFPは238個のアミノ酸からなる27 kDaの単量体であり、青色光またはUV光で励起されると緑色光（509 nmで最大発光）を発します。

6-hisタグを含むリコンビナント・緑色蛍光タンパク質（GFP）を、ニッケルカラムによるアフィニティークロマトグラフィーに続いてP-100ゲルろ過カラムによるクロマトグラフィーによって高度に精製しました。 得られた産物は、唯一のsignlとして存在しました。

この抗緑色蛍光タンパク質抗体は、IC、IP、WBでの使用について検証済みであり、緑色蛍光タンパク質を検出できます。

イムノブロッティング： AB16901は、GFPを発現している大腸菌由来のライセートでは適切な分子量のバンド（30 kDa）を検出しますが、GFPを発現していない大腸菌、またはGFP発現プラスミドを含む大腸菌から調製されたが誘導されていないライセートでは適切な分子量のバンドを検出しません。AB16901は、GFPまたはタウ-GFP融合タンパク質の発現を指示するプラスミドとトランスフェクトしたCOSもしくは一次ニューロンまたは線維芽細胞由来のライセート中のGFPを検出します。 ラット脳ライセート由来のタンパク質50 μg（陰性対照）をSDS-PAGEで分画したとき、シグナルは検出されませんでした。 抗ニワトリセイヨウワサビペルオキシダーゼ標識二次抗体を用いてECLまたはDABを用いた比色アッセイにより検出したとき、抗体価は10～20,000でした。

免疫細胞染色： GFPは、GFPまたはGFP融合タンパク質のいずれかの発現を指示するプラスミドでトランスフェクトした細胞において検出されます。 GFPを発現していない細胞は検出可能な染色を示しません。 AB結合を、HRP結合抗ニワトリ二次抗体を用いて測定し、DABを用いて可視化しました。 抗GFP抗体は1:2,500～5,000倍希釈で使用しました。 4%ホルムアルデヒド含有PBS（pH 7.4）を用いて細胞を固定しました。 免疫細胞染色のため、培養物を4%ホルムアルデヒド含有PBS（pH7.4）中で室温で20分間固定しました。 細胞を0.2%Triton X-100および2%血清（二次抗体を生じたアミナールに対応する）を含有するPBS中で室温で20分間透過処理します。 次に、細胞培養液を2%血清（上記のとおり）含有PBS中の一次抗血清と4℃で一晩培養します。 抗体結合は、アビジン/ビオチン/ペルオキシダーゼ検出系を用いて検出します。 ステップの間に培養物を4回（各10分）洗浄し、反応生成物を氷冷下で0.05%ジアミノベンジジン/0.02%過酸化水素溶液を用いて8～10分間処理します。 一次ニューロンおよびゼブラフィッシュ線維芽細胞中のGFPを検出するためにAB16901が使用されています。

免疫沈降： 細胞ライセート最大500 μLあたり5 μgの抗体。 ニワトリIgGはプロテインAまたはプロテインGとは反応しないため、捕捉抗体または抗ニワトリ抗体ビーズにはウサギ抗ニワトリ二次抗体を使用することが重要です。

最適な希釈濃度は、ご自身で決定してください。

研究のカテゴリ
エピトープタグおよび一般的使用

研究のサブカテゴリ
エピトープタグ

AB16901は、オワンクラゲ由来の高度に精製された天然GFPに対して作製されます。天然および組換え由来のGFPと反応します。

ニワトリの精製免疫グロブリン、0.02%アジ化ナトリウム含有TBS（pH7.5）に溶解。

フォーマット：精製品

硫酸アンモニウム沈殿

未希釈の抗体溶液は、2～8℃で約6ヵ月間安定です。

輸送中、少量の内容物が製品バイアルの封部分に入り込むことがあります。容量が200 μL以下の製品については、バイアルを硬い表面上で軽くたたくか、または卓上型遠心分離機で短時間遠心して容器キャップ内の液体を取り除くことが推奨されます。

対照
細胞で発現しているGFP融合タンパク質

濃度：ロットの具体的な濃度につきましては分析証明書をご参照ください。

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