Anti-Collagen Type I (COL1A1) Antibody

コラーゲンは進化の過程で高度に保存されており、三重ヘリックス構造に必要な部分である途切れない「グリシンX Y」トリプレットリピートが特徴です。I型コラーゲン（95 kDa）は、骨、角膜、皮膚、腱に存在します。コードする遺伝子の変異は、骨形成不全症、エーラス・ダンロス症候群、および特発性骨粗鬆症と関連しています。この遺伝子と血小板由来増殖因子ベータが存在する17番および22番染色体の相互転座は、隆起性皮膚線維肉腫と呼ばれる特定のタイプの皮膚腫瘍（増殖因子のアップレギュレートされた発現に起因する）と関連しています。

ELISA：天然I型コラーゲンの検出捕捉：2～4 μg/mL、検出：抗I型コラーゲン抗体のμg/mLの希釈液で、50 ngのヒトI型コラーゲンを検出できるでしょう。他のコラーゲンとは反応しません。 より低濃度のコラーゲンの検出には、より高レベルの抗体が必要な可能性があります。注記：この抗体はそれ自体で対にはなりません。

免疫組織染色（未固定凍結切片）：

冷凍ミクロトームを用いた凍結サンプルの6 μm厚の切片。徹底した風乾。 PBSで再水和してください。 通常、IF試験ではブロッキングは不要です。DABを使用する場合は、ペルオキシダーゼの前処理を推奨します。PBS中の2%BSAブロッキングによりバックグランドが低下します。

抗I型コラーゲン抗体をPBSバッファーで希釈し、サンプルに加えて60分間インキュベートします（希釈倍率1:100～1:500）。

PBS中で10分間、切片を2回洗浄します。 FITC結合抗マウス抗体を添加し、60分間インキュベートします。

PBS中で10分間、2回洗浄します。

1 mMの1,4-フェニレンジアミンを含むグリセロール／水（9:1 v/v）で切片をマウントします。（FITC安定性またはChemiconカタログ番号5096または5013の使用について

注記：

予備的研究では、切片を各種酵素（例：0.1 M HCl＋0.1%ペプシンで37°Cで5分間）で前処理（ステップ2の前）することで、特定の組織の染色性が向上することが示唆されています。

フローサイトメトリー： 1:100

イムノブロッティング：希釈倍率1:1,000で使用、天然、未変成、非還元ウェスタンブロッティングのみ。 Ramshaw, et.al (1988) "Electrophoretic and electroblotting of native collagens." Anal. Biochem. 168:82-87. 従来型の還元ウェスタンブロッティングには使用できません。

すなわち、天然コラーゲン泳動用のPAGEゲルの準備が必要です。

架橋剤としてモノマーに対して3.2%(w/w)のビスアクリルアミドを含む3%(w/v)の全アクリルアミド分離ゲルを、10 mM乳酸カルシウム（pH6.8）中で、0.05〜0.1%のTEMEDおよび0.05〜0.1%の過硫酸アンモニウム（10%保存溶液から添加）の添加により、垂直ガラスプレート間で重合させます。 陰極（負極）バッファーは乳酸で調整した50 mM Trisバッファー（pH 6.6）で、陽極（正極）バッファーは0.1 M乳酸（pH 2.5）です（Friis, SJ et al, 1985 J Biochem Biophys Methods 10:301-306.）。

サンプル負荷前に、ゲルを100Vで少なくとも90分間作動させます。コラーゲンサンプルを10%スクロースを含む0.1 M乳酸または0.1 M酢酸に1mg/mLで溶解し、1レーンあたり5～10 μgを負荷します。必要に応じてメチルグリーンを添加し、負荷を補助します。室温、70Vで、5時間電気泳動します。

ブロッティングには0.1 M乳酸（pH 2.5）を用い、室温、20Vで、16時間行うと、コラーゲンは陰極に向かって移動する。

この抗I型コラーゲン抗体クローン5D8-G9は、I型コラーゲンの検出において、ELISA、FC、WB、HFでの使用が検証されています。

研究カテゴリー
細胞構造

研究サブカテゴリー
ECMタンパク質

コラーゲンタイプI抗体は、I型コラーゲンのC末端付近のエピトープに結合するモノクローナルIgG1抗体です。

I型コラーゲン抗体は、ヒトおよびウシのI型コラーゲンに高い親和性を示します。 III、VおよびVI型コラーゲン、または結合組織タンパク質との交差反応の証拠はありません。天然の未変成I型コラーゲンのみと反応します。

50 mM Tris 酢酸塩、150 mM NaCl 中 1 mg/mL の濃度で 100μg の精製抗体。

免疫グロブリン画分をプロテイン A クロマトグラフィーで精製し、クマシー PAGE で >95% の純度を示しました。抗 I 型コラーゲン抗体は 0.22 μm でろ過されて提供されます。

フォーマット：精製

抗I型コラーゲン抗体は、常温で溶液状態として出荷されます。 2～8°Cで、最長6か月安定して保存できます。

警告：モノクローナル試薬溶液は、保存剤として0.1%のアジ化ナトリウムを含みます。パイプ中にこの物質が蓄積することで生じる潜在的な危険があるため、使用済み試薬は十分な量の水とともに処分してください。

コントロール
ヒト腎臓ライセート

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