抗DNA-RNAハイブリッド抗体、クローンS9.6

メルクのカタログまたは製品に添付されたメルクのその他の文書に記載されていない場合、メルクの製品は研究用途のみを目的としているため、他のいかなる目的にも使用することはできません。このような目的としては、未承認の商業用途、in vitroの診断用途、ex vivoあるいはin vivoの治療用途、またはヒトあるいは動物へのあらゆる種類の消費あるいは適用などがありますが、これらに限定されません。

HeLa細胞の免疫細胞染色で評価されています。

免疫細胞染色：希釈倍率1:50で使用、4%パラホルムアルデヒド固定、0.3% Triton X-100透過処理HeLa細胞において、核およびミトコンドリアDNA-RNAハイブリッドの免疫局在性を評価しました。

ドットブロット解析：0.2 µg/mLで使用、RNase H欠損酵母株からのゲノム抽出物で、野生型株からの抽出物よりも高いレベルのDNA-RNAハイブリッドを検出できます（Lorenzo Costantino, Ph.D., Koshland Lab, University of California at Berkley, U.S.A.のご厚意による）。

アフィニティー結合アッセイ：クローンS9.6はDNA-RNAヘテロポリマーおよびポリ(I)-ポリ(dC)に同等に結合しましたが、同程度の結合を達成するには、100倍高い濃度のポリ(A)-ポリ(dT)が必要でした。クローンS9.6は、一本鎖DNA、二本鎖DNAおよびRNA、リボソームRNAには結合しませんでした（Boguslawski, S.J., et al. (1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130）.

クロマチン免疫沈降（ChIP）：代表的なロットは、HeLa細胞で、活発に転写される4つの遺伝子におけるDNA RNAハイブリッドの増加を、BRCA1またはBRCA2のshRNA媒介ノックダウン時には検出しましたが、PCID2またはRAD51のノックダウン時には検出しませんでした（Bhatia, V., et al. (2014).Nature.511(7509):362-365）。

クロマチン免疫沈降（ChIP）：代表的なロットは、HeLaクロマチン調製物を用いて、ベータアクチン遺伝子で形成されたRループを検出しました。クロマチン調製物をRNase H処理すると、クローンS9.6による標的クロマチンフラグメントの免疫沈降が阻害されました（Skourti-Stathaki, K., et al. (2011).Mol. Cell. 42(6):794-805）。

クロマチン免疫沈降シーケンス（ChIP-seq）：代表的なロットは、ChIP-seq分析により、出芽酵母におけるDNA-RNAハイブリッドのゲノム全体に渡る分布を検出しました（El Hage, A., et al. (2014).PLoS Genet. 10(10):e1004716）.

免疫細胞染色：代表的なロットは、メタノール固定H1ヒト胚性幹細胞（hESCs）およびホルムアルデヒド固定HeLa細胞の蛍光免疫細胞染色により、核Rループの免疫局在性を評価しました。（Bhatia, V., et al. (2014).Nature.511(7509):362-365; Ginno, P.A., et al. (2012).Mol. Cell. 45(6):814-825）。

免疫沈降：代表的なロットは、in vitro転写されたRループ基質（DNA-RNAハイブリッド）を免疫沈降させましたが、二本鎖DNA（dsDNA）は免疫沈降させませんでした（Ginno, P.A., et al. (2012).Mol. Cell. 45(6):814-825）。

抗DNA-RNAハイブリッド、クローンS9.6、カタログ番号MABE1095は、DNA-RNAハイブリッドを特異的に検出するマウスモノクローナル抗体であり、アフィニティー結合アッセイ、クロマチン免疫沈降（ChIP）、ChIP-seq、ドットブロット、免疫細胞染色、および免疫沈降でテストされています。

研究カテゴリー
エピジェネティクス・核内機能分子

クローンS9.6はDNA-RNAヘテロポリマーおよびポリ(I)-ポリ(dC)に同等に結合しましたが、同程度の結合を達成するには、100倍高い濃度のポリ(A)-ポリ(dT)が必要でした。クローンS9.6は、一本鎖DNA、二本鎖DNAおよびRNA、リボソームRNAには結合しませんでした（Boguslawski, S.J., et al. (1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130）.

標的のDNA-RNAヘテロ二本鎖（Rループ）構造は、配列特異的または種特異的ではありません。

DNA-RNAハイブリッドは真核細胞内で自然に発生し、その濃度は転写活性の高い部位で高くなります。転写調節機能を備えた非標準的な核酸構造です。存在すると、遺伝子座に染色体切断が生じやすくなると報告されています。DNA:RNAを形成する遺伝子座は、相補的に置換されたDNA鎖上に一本鎖核酸結合タンパク質の第2のターゲットを有する、二本鎖A/B中間構造を形成します。これらは、DNAメチルトランスフェラーゼ活性に耐性があることが示されています。DNA:RNAハイブリッドの形成は、多くの神経疾患と関連付けられています。DNA:RNAヘリカーゼセナタキシン（SETX）の変異は，筋萎縮性側索硬化症4型の優性若年型および眼球運動失行を伴う失調症2型の劣性型に関与しています。

DNA依存性RNAポリメラーゼを用いたphi X174一本鎖DNAの転写により調製したDNA-RNAヘテロポリマー二本鎖（Boguslawski, S.J., et al. (1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130）.

濃度：ロットに固有のデータシートを参照してください。

0.1 Mトリス-グリシン（pH 7.4）、150 mM NaCl、0.05%アジ化ナトリウムを含むバッファー中の精製マウスIgG2aκ。

フォーマット：精製

精製プロテインG。

2～8°Cで受領日から1年間安定です。