製品名
5′/3′RACEキット、第2 世代, sufficient for 10 reactions
usage
sufficient for 10 reactions
manufacturer/tradename
Roche
shipped in
dry ice
storage temp.
−20°C (−15°C to −25°C)
Quality Level
関連するカテゴリー
Application
5′/3′ RACEキット、第二世代は以下に適します。
- RNA分子の構造的研究および発現の研究
- 全長cDNAの生成
- 低コピーRNAメッセージからの5′または3′末端の単離および特性評価
- 第一鎖cDNA合成
- 希少mRNAの増幅および詳細なクローニング
- エクソントラッピング法との併用
- RACE反応の産物はクローニングなしに直接配列が可能
Biochem/physiol Actions
熱不活性化：末端転移酵素：70℃で10分間
トランスクリプター逆転写酵素：85℃で5分間
トランスクリプター逆転写酵素：85℃で5分間
Features and Benefits
- 安定した性能：組換えトランスクリプター逆転写酵素は、困難とされている2次RNA構造の諸領域を介しての進行を可能にします。
- 便利：同じキットを用いてRNAの5′/3′末端の機能および発現に関する研究を行えます。
- 信頼性：組換え末端転移酵素を使用したcDNAのdAテーリングは、不適切な切断の可能性を低減させます。
- 再現性：非3′dTを有するオリゴdT-アンカープライマーは、ポリ（A）テールの内側端への正しい結合を保障します。
- 長いフラグメントの生成：トランスクリプター逆転写酵素を使用することで、長さ最大14 kbのcDNAを生成します。
コントロール反応には、コントロールRNAをコントロールプライマーneo1/revを使用して第1鎖cDNAに転写させる反応が含まれます。cDNAの増幅は、コントロールプライマーneo2/revおよびneo3/forを使用して行い、157 bpのPCR産物が得られます。精製cDNAのテーリングはdATPを用いて行います。cDNAの増幅は、オリゴdT-アンカープライマーおよびコントロールプライマーneo2/revを使用して行い、293 bpのPCR産物が得られます。
General description
cDNA末端の迅速増幅（RACE）は、部分的に分かっている配列から全長cDNAを迅速に得るために使用される一般的な技術です。5′/3′ RACEキットには、トランスクリプター逆転写酵素および組換え末端転移酵素が含まれています。トランスクリプター逆転写酵素は、最大14 kbの5′または3′ cDNAフラグメントを高感度かつ迅速に増幅するために全長cDNAを転写します。熱安定性（+65℃まで）を有するため、高度な二次構造を持つGCリッチなテンプレートとともに作用できます。トランスクリプター逆転写酵素を使用することで高感度に到達でき、高効率でcDNAが合成され、長いRACE産物が生成されます。組換え末端転移酵素は、ホモポリマーのAテールをcDNAの3′ 末端に付加するために使用します。ポリ（A）+テールは、オリゴ（dT）-アンカープライマーによる不適切な切断の可能性を低減させ、G/Cハイブリダイゼーションに比べてA/Tハイブリダイゼーションが弱いという問題を克服します。また、オリゴ（dT）-アンカープライマーを内側にハイブリダイズし増幅産物を切断するには、A残基の長いストレッチが必要です。遺伝子特異的プライマーおよびオリゴ（dT）-アンカープライマーを使用して、テール化cDNAをPCRで増幅します。得られたcDNAの増幅を、ネステッド特異的プライマーおよびPCR-アンカープライマーを使用した2番目のPCRで実施し、後の実験のためにRACE産物を適切なベクターにクローニングできるようにします。
Other Notes
ライフサイエンス研究専用。診断には使用しないこと。
Packaging
1つのキットに12のコンポーネントが含まれます。
保管分類
12 - Non Combustible Liquids
wgk
WGK 1
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
D Chen et al.
BioTechniques, 30(3), 574-580 (2001-03-17)
In determining the terminal sequences of the genomic dsRNAs of rotavirus by 5'-rapid amplification of cDNA ends (5'-RACE), it was found that most of the viral cDNAs contained extra nucleotides at their 5' termini that had not been reported before
Rapid amplification of cDNA ends (RACE)
Yeku O and Frohman MA
Methods in Molecular Biology, 107-122 (2011)
Rapid amplification of 5 [prime] complementary DNA ends (5 [prime] RACE)
Sambrook J and Russell DW
Nature methods, 2, 629-630 (2005)
Erdong Cheng et al.
Journal of virology, 86(18), 10173-10185 (2012-07-13)
Hantaviruses, similarly to other negative-strand segmented RNA viruses, initiate the synthesis of translation-competent capped mRNAs by a unique cap-snatching mechanism. Hantavirus nucleocapsid protein (N) binds to host mRNA caps and requires four nucleotides adjacent to the 5' cap for high-affinity
Pengli Bu et al.
The Journal of endocrinology, 234(2), 217-232 (2017-06-04)
Mammals share common strategies for regulating reproduction, including a conserved hypothalamic-pituitary-gonadal axis; yet, individual species exhibit differences in reproductive performance. In this report, we describe the discovery of a species-restricted homeostatic control system programming testis growth and function. Prl3c1 is
資料
cDNA末端迅速増幅（RACE）は、部分的に既知の配列から全長cDNAを得るために使用します。5'/3' RACEキットには、transcriptor 逆転写酵素および組換え末端転移酵素が含まれています。
In addition to the troubleshooting provided in the product manual, most probably the efficiency of the tailing reaction performed by Terminal Transferase could be impaired. This could occur due to several reasons (which will not only affect the control reaction, but 5′ RACE in general):
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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