DIG RNAラベリングキット（SP6/T7）

アッセイ時間：145分
サンプル材料

• 直線化プラスミドDNA
• PCR生成物

原理
DIG RNAラベリングキットは、DIG-標識された、既知の長さの一重鎖RNAプローブを生成します。SP6またはT7 RNAポリメラーゼのどちらも、テンプレートDNAからin vitroでこれらのプローブを転写します（ジゴキシゲニン-UTP存在下）。
in vitro転写によるRNAラベリング
転写されるDNAテンプレートは、SP6およびT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクター（例、pSPT 18または19）のポリリンカーサイトに複製されます。隣接したテンプレートDNAが適切な場所で直線化され、RNAポリメラーゼが「ランオフ」転写物を生成します。DIG-UTPは転写物に取り込まれます。新たに合成されたRNAのすべての20～25番目のヌクレオチドが、DIG-UTPです。標準的な転写反応では、ヌクレオチド濃度は限界に達しないため、本反応は大量の標識化RNAを生成できます。

SP6およびT7 RNAポリメラーゼでのin vitro転写による、RNAのジゴキシゲニン-UTPラベリングのためのキット。この方法により、既知の長さの一重鎖RNAプローブが生成され、幅広いハイブリダイゼーションテクニックで使用できます。

メルクは、グリーン・ケミストリーの12原則の1つ以上に則った、より環境に配慮した製品（グリーン代替品）をお客様にお届けできるよう最善の努力をします。この製品はさらに安全な化学品として設計されます。  DIGシステムは、放射活性を用いて核酸の標識付けと検出を行う方法に対する、感度が高くコスト効率に優れた代替方法として確立されました。DIGシステムの多用途性を証明する多くの刊行物が入手できるため、放射標識を使用することは、ハイブリッド形成法用にDNAを標識する唯一のオプションではなくなりました。

SP6およびT7 RNAポリメラーゼでのin vitro転写による、RNAのDIG-11-UTPラベリング。DIG標識され「ランオフ」された転写物が高い効率で合成され、以下のような幅広いハイブリダイゼーションテクニックで使用できます：

• ノーザンブロット
• サザンブロット
• In situハイブリダイゼーション
• プラークまたはコロニーリフト
• RNアーゼプロテクション実験

特異性と感度の高いシステムにより、DIG標識化プローブは、1 μgの全ヒトDNAにおけるシングルコピー遺伝子の検出に使用できます。
注意：DIGとUTPの結合はアルカリに耐性があるため、DIG標識化RNAはアルカリ処理による断片化に使用できます。DIG標識化RNAプローブのサイズをわずかに小さくしたものは、in situハイブリダイゼーションにおける特定のアプリケーションにより適しています。

感度および特異性
DIG標識化RNAプローブは、以下のアッセイ条件下で、わずか1 μgの哺乳類DNA中のシングルコピー遺伝子を検出できます。ハイブリダイゼーションミックスは、1 mLあたり20～100 ngの標識化プローブを含み、結合したプローブは、抗-DIG-APで検出され、化学発光基質のCDP-Starで可視化されます。
熱失活：2 μLの 0.2 M EDTA（pH 8.0）を添加して反応を停止します。

1つのキットには12のコンポーネントが含まれています。

原理：転写されるDNAテンプレートが、SP6および/またはT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクターのポリリンカーサイトに複製されます。適切な部位における直線化の後、DIG-UTPの存在下でRNAが転写されます。標準的な条件下では、約10 μgのDIG標識化完全長RNAが、1 μgのテンプレートから転写されます。

ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断には使用できません。