ヘキサヌクレオチドミックス

放射性のジゴキシゲニンあるいはビオチン標識されたヌクレオチドでDNAの急速ランダムプライムド標識するための使い勝手がよいオリゴヌクレオチド混合物。この方法では、、3'- OH末端のランダムオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いて、クレノウポリメラーゼによって相補DNA鎖を合成します。

Hexanucleotide Mix（ヘキサヌクレオチドミックス）は、ランダムプライムドDNA標識を可能とする全ての配列のヘキサヌクレオチドの混合物です。
高度に特異的な活性を持つ標識DNAプローブは様々なハイブリダイゼーション技術で使用されます：

• 遺伝子ライブラリのスクリーニング
• サザンおよびノーザンブロット法
• in situのハイブリダイゼーション
• RT-PCR
• cDNAライブラリーの生成
• 一本鎖cDNAの合成
• ベクター力価の測定における
• セカンドストランドの合成

熱不活化：2 µLの0.2 M EDTA（pH 8.0）を加えること、および／または65°Cで10分間加熱することによって反応を止めます。

「ランダムプライムド」のDNA標識方法は、標識化されるDNAへのハイブリダイゼーションが可能なヘキサヌクレオチドの混合物すべてをもとにフェインベルグとフォーゲルシュタインによって開発されました。ヘキサヌクレオチドプライマー混合物には全ての配列の組み合わせが表現されます。これによってプライマーが統計的特徴をもってテンプレートDNAに結合します。したがって、テンプレートDNAの長さ全体において標識化の程度が等しいことが保証されます。相補鎖はラベリンググレードのクレノウ酵素を用いて3'-OH末端のランダムヘキサヌクレオチドプライマーから合成されます。この反応に存在する修飾三リン酸デオキシリボヌクレオシド（[³²P]、 [³⁵S]、[³H], 、または［¹²⁵I］ジゴキシゲニンあるいはビオチン標識されている）が新しく合成された相補DNA鎖中に組み込まれます。

本製品はランダムヘキサヌクレオチドの10倍濃縮混合物です。統計学的に、この混合物は最高4,096個の異なるヘキサヌクレオチドを含む可能性がありますが、これらはおそらく異なる量で存在します。

内容
ヘキサヌクレオチド10倍濃縮混合物 （62.5 A₂₆₀単位/mL） 反応緩衝液 ［0.5M トリス-HCl, 0.1M MgCl₂、1mM ジチオエリスリトール（DTE）、2 mg/mL BSA、pH 7.2 （+20°C）］溶液
注記：この混合物は、DIG DNA標識と検出用キットとDIG DNAラベリングキットのバイアル5、 およびRandom Primed（ランダムプライムド） DNAラベリングキットのバイアル6で供給されるものと同一の混合物です。

分析時間
標準の標識化（放射性）：50 分
ジゴキシゲニン-11-dUTPを用いる標識アッセイ：80 分

サンプル材料

• DNAフラグメント
• 直線化プラスミドDNA
• λDNA

注記：標識化するDNAフラグメントの長さは反応に影響しません。長さ 100bpのDNAフラグメントは直線化プラスミドDNAあるいはλ-DNAと同じように良好に標識化されます。入力DNAは、標識されたDNAの合成のテンプレートとして単独で働き、反応中に分解することがないため、この方法を用いて最低量のDNA（10 ng）を標識化することが可能となります。

合成:4個のベース全てがこのランダムヘキサヌクレオチド混合物の合成に使用されます。最初の反応でスターターヌクレオチドが固相担体に結合します。次のカップリング反応では、ヘキサマーが生成するまで等モル量の4つのdNTPがスターターヌクレオチドに結合します。その後ヘキサマーが固相担体から放出されます。
合成後：オリゴヌクレオチドをHPLC精製、脱塩し、5'-リン酸化します。

吸収:62.5A₂₆₀単位が2.5 mg/mLのヘキサヌクレオチドに相当します。

ランダムプライムドDNAラベリングキットの機能テスト

生命科学研究専用です。診断手順には使用しません。