アポトーシスDNAラダーキット

本キットは、DNAラダー解析のためのアポトーシス性DNAの分離方法を提供します。使用する精製法は、他のDNA精製法（例、フェノール/クロロホルム抽出、DNA沈殿）よりも非常に高速です。精製されたDNAは、ゲルローディングバッファーと直接混合でき、アガロースゲル上で分析できます。

細胞死の研究には、アポトーシスであるか、またはネクローシスであるかといった死の解析が含まれます。アポトーシスは以下によって特徴付けられます：

• 溶解前の、DNAの非ランダムフラグメンテーション（アガロースゲル電気泳動後の「ラダー」パターン）1
• 膜結合小胞（または「アポトーシス小体」）の形成
• 細胞質の濃度による細胞の収縮

同様に、ネクローシス（または生理学的細胞死）は以下によって特徴付けられます

• DNAのランダム消化（アガロースゲル電気泳動後のDNAスメア）
• 膜のインテグリティの喪失と細胞の溶解による、オルガネラおよび細胞の膨張
• 溶解後のDNAフラグメンテーション

これらの違いが示すように、細胞死の分類は、細胞の形態観察を通じて、あるいは、より客観的には、ゲノムDNAの解析によって可能です。ゲル上でのDNAの分離は、アポトーシスとネクローシスを区別するための、迅速でドキュメンタブルな形のデータを提供します。

Apoptotic DNA-Ladder Kit（アポトーシスDNA-ラダーキット）は、アポトーシス性細胞死の測定のためのゲル電気泳動によって解析できるDNAの迅速な分離を提供します。

キットに概説した条件下では、核酸のみがガラスファイバーフィルターに結合します。塩類、タンパク質、および他の細胞成分は結合しません。

血液または細胞の溶解は、特別な結合/溶解バッファーでサンプルをインキュベートすることで可能です。サンプルは、ガラスファイバーフリースを含むカラムを通して遠心分離されます。結合/溶解バッファーでは、核酸は迅速かつ選択的にガラスファイバーの表面に結合します。洗浄バッファーは塩類、タンパク質、およびその他の細胞の残骸などを洗浄除去します。DNAはその後、溶出バッファーと共に、遠心分離ステップを介して回収されます。

1つのキットには6のコンポーネントが含まれています。

使用液：注記： 精製反応を始める前に、溶出バッファーを70°Cに温めてください。他のすべての試薬は15～25°Cで使用してください。

使用液の調製

• 80 mLのエタノール（分析グレード）を洗浄バッファーに加えます。
• ポジティブコントロール（紫色のキャップ）を400 μLの結合/溶解バッファーに溶解し、すぐに混合します。
• 15～25°Cで10分間インキュベートします。

DNAゲル電気泳動用使用液の調製

EDTA溶液（0.5 M）
18.6 gのEDTAを80 mLの再蒸留水に溶解し、撹拌します。1 M NaOHを使用してpHを8.0 ± 0.1に調整します。EDTAはアルカリ性のpHのみで溶解してください。溶解後、再蒸留水で100 mLにします。

TBE-バッファー
5.4 gのTris、2.8 gのホウ酸を、800 mLの再蒸留水に溶解し、2 mL
の0.5 M EDTA溶液を加えます。溶けるまで撹拌し、最終的なpHを8.0 ± 0.1とします。再蒸留水で全量を1Lにします。

エチジウムブロマイドのストック溶液
50 mgのエチジウムブロマイドを5 mLの再蒸留水に溶解します（エチジウムブロマイドには変異原性および癌原性があります。グローブを着用し、エチジウムブロマイド溶液を扱うときは注意してください）。
別の方法として、SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain がエチジウムブロマイドの代わりに使用できます。

ローディングバッファー（10倍）
0.1 gのドデシル硫酸ナトリウム、25 mgのブロモフェノールブルーを、7 mLの再蒸留水に溶解し、3 mLのグリセロールを加えます
保管条件（使用液）：分離したコントロールDNAを-15～-25°Cで保存した場合、ポジティブコントロールは調製後14日間使用できます。

ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断用には使用できません。

購入者への注意事項：本製品は、Qiagenの保有する特許のライセンスを受けています。