コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

Clostridium histolyticum由来コラゲナーゼは、分離細胞懸濁液の調製など、生物学的研究において幅広く使用されます。本製品は、ヒト腫瘍、マウス腎臓、ヒト成体および胎児脳、肺、ならびに他の上皮組織の凝集防止に適しています。また、肝臓および腎臓の灌流実験、膵臓の消化、ラットの肝臓の非実質細胞の分離、ならびに肝細胞の調製においても効果的であることが示されています。 コラゲナーゼはまた、終端糖化産物の研究のための動脈組織の調製にも使用されています。本酵素は、肝細胞の遊離のために約1 mg/mLの濃度でテストされています。消化に使用する濃度の幅は、0.1～5 mg/mLです。

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

本コラゲナーゼ製品は、C. histolyticumによって分泌された酵素の混合物であり、分泌された酵素中に含まれる10～18の成分の相対比率によって区別される異なる製品があります。 主成分は、2種類のコラゲナーゼ、クロストリパイン、および中性プロテアーゼです。 これらの酵素の相乗効果により、コラーゲンや他の細胞内物質が分解されます。コラゲナーゼと中性プロテアーゼの両方の作用が、細胞の組織からの効果的な遊離に必要です。 様々な種類のコラーゲンが、コラゲナーゼの天然基質です。

納品後未開封なら、本製品は2-8°Cで1年間安定です。

コラゲナーゼは、コラーゲンと呼ばれる三重螺旋タンパク質を切断します。3種類の組織コラゲナーゼが存在し、それらはマトリックスメタロプロテアーゼ（MMP）ファミリーに属しています。Clostridium histolyticumから得たコラゲナーゼは、強力な活性を持ち、4～10°Cという低温において、両端からコラーゲンを消化します。未処理のコラゲナーゼ混合物は、2つの主な酵素タイプ、つまり、コラゲナーゼおよびクロストリパインを含みます。

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

本製品は、Mandl, I.らの報告における最初の40％硫酸アンモニウム画分と同等です（Mandl, I., et al., J. Clin.Invest., 32, 1323, 1953.）。溶液は通常、TESCAバッファーにより、1～2 mg/mLで調製されます（50 mM TES、0.36 mM塩化カルシウムを含む、37°CでpH 7.4）。