コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

コラゲナーゼは、終末糖化産物(AGE)研究のための動脈組織の調製に使用されています。この酵素は、その他のプロテアーゼと共に、ヒト腫瘍、マウス腎臓、ヒトの脳、肺上皮およびその他多くの組織の脱凝集にも使用されています。また、肝臓と腎臓の潅流研究、膵臓の消化、および非実質肝細胞の単離にも有効です。本酵素は、肝細胞の遊離における適性を、各ラット肝臓に対して濃度約1 mg/mL、全液量100 mLで試験されています。

シーケンス用の単一細胞懸濁液の調製における使用に適しています。

Clostridium histolyticum由来コラゲナーゼは、次の用途に使用されています：

• 腫瘍組織の消化のためのコラゲナーゼ液の調製
• 摘出された腸間膜脂肪組織の消化のためのリン酸緩衝生理食塩水のサプリメントとして
• 結腸セグメントの消化のためのロズウェルパーク記念研究所培地（RPMI-1640）のサプリメントとして
• 子宮内膜組織の消化のため
• 被膜を除去した精巣の消化のための酵素Aおよび酵素Bの調製

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

組織からの効果的な細胞の遊離には、コラゲナーゼ酵素と中性プロテアーゼの作用を必要とします。コラゲナーゼは、酵素1モルあたり4グラムのカルシウム（Ca²⁺）原子によって活性化されます。培養濾液は、分子量68～130 kDaの間の、少なくとも7つの異なるプロテアーゼを含んでいると思われます。至適pHは6.3～8.8です。本酵素は、通常、組織サンプル中の結合成分を消化し、個々の細胞を遊離させるために使用されます。コラゲナーゼ処理により、幾つかの細胞が死ぬことがあります。通常、消化に使用する濃度は0.1～5 mg/mLの範囲です。反応時間は15分から数時間までと異なり、過剰な細胞死を引き起こすことなく、十分な細胞の解離を得ることができます。カルシウムおよびBSAを含むKrebs Ringerバッファーが望ましく、Zn²⁺が活性に必要です。

クロストリジウム属細菌（Clostridium histolyticum）は、2種類のコラゲナーゼを産生します。クロストリジウム属由来のコラゲナーゼは、哺乳類由来のコラゲナーゼよりも効率が良いです。コラーゲン三重ヘリックス内の複数の切断部位で切断します。クロストリジウム属由来のコラゲナーゼは、ガス壊疽への細菌侵入に関与しています。

溶液は通常、TESCAバッファーにより、1～2 mg/mLで調製されます（50 mM TES、0.36 mM塩化カルシウムを含む、37°CでpH 7.4）。
また本製品は、クロストリパイン、中性プロテアーゼ、およびトリプシン活性を含みます。

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

供給時点でのこの製品は－20℃で6年間安定です。37℃、50℃および－20℃では、30日間でFALGPAまたはプロテアーゼ活性が減少することはありません。粗コラゲナーゼ溶液は、アリコット（10 mg/mL）で急速凍結し、－20℃で凍結維持すれば安定です。さらに凍結・融解サイクルを繰り返すと、溶液が損傷を受けます。 この製品は、氷上に保つと100%の活性を7時間にわたって保持します。