コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

Clostridium histolyticumから得られたコラゲナーゼは、以下の用途に使用されています。

• コラーゲン足場から骨肉腫143B細胞を採取するために
• 膵島 および頸動脈の組織消化に
• 絨毛膜絨毛の消化に
• 固形腫瘍におけるATPに基づく腫瘍化学感受性アッセイ（ATP-TCA）のための酵素的解離に

Clostridium histolyticumは、2つのクラスのコラゲナーゼを産生します。クロストリジウムのコラゲナーゼは、哺乳動物のコラゲナーゼよりも非常に効果的であることが認められています。コラーゲン三重らせん内の複数の切断部位で切断できます。ガス壊疽における細菌の侵入に関与しています。

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

組織からの細胞の効果的な放出はコラーゲナーゼ酵素と中性プロテアーゼの両方の機能を必要とします。コラーゲナーゼは酵素1モルあたり4グラム原子のカルシウム（Ca ²⁺）によって活性化されます。培養濾液は68～130 kDaの分子量範囲にある少なくとも7つの異なるプロテアーゼを含むと思われます。最適pHは6.3～8.8です。この酵素は一般に組織サンプルの連結成分を消化して個々の細胞を遊離させるために使用されます。コラーゲナーゼ処理は若干の細胞を死なせる可能性があります。一般に、0.1～5 mg/mLで変化する濃度が消化に使用されます。15分から数時間の反応時間によって、さほど多くの細胞を死なせることなく十分な効率で細胞分離できます。カルシウムおよびBSAを含むクレブス・リンゲル緩衝液が推奨されます。また活性にはZn²⁺が必要です。この酵素は約1mg/mLの濃度で、全体積100 mLのラット肝臓個々における肝細胞の放出に関して試験されました。

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。