コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

コラゲナーゼは、コラーゲンと呼ばれる三重らせんタンパク質を切断するプロテアーゼです。組織コラゲナーゼは3種類あり、これらはマトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）ファミリーに属します。 Clostridium histolyticumから得たコラゲナーゼは、強力な活性を持ち、4～10°Cという低温において、両端からコラーゲンを消化します。未処理のコラゲナーゼ混合物は、2つの主な酵素タイプ、つまり、コラゲナーゼおよびクロストリパインを含みます。

Clostridium histolyticum由来コラゲナーゼは以下の用途に使用されます：

• セルトリ細胞の分離
• 酵素的手法の比較
• 免疫細胞化学分析のための組織調製
• 精巣内精子採取
• 単一細胞懸濁液の調製
• 免疫蛍光

本製品は、ヒト腫瘍、マウス腎、ヒト成人・胎児脳、肺、その他多くの上皮組織の脱凝集に適しています。また、肝臓および腎臓の灌流実験、膵臓の消化、ならびに肝細胞の調製においても効果的であることが示されています。コラゲナーゼはまた、終端糖化産物の研究のための動脈組織の調製にも使用されています。本酵素は、肝細胞の遊離のために約1mg/mLの濃度でテストされています。消化に使用する濃度の幅は、0.1～5mg/mLです。

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

コラゲナーゼ製品は、C. histolyticumによって分泌される酵素の混合物であり、分泌される酵素中にみられる10～18の構成要素の相対比によって異なる製品が識別されます。主要な構成要素は、2種類のコラゲナーゼ、クロストリパインおよび中性プロテアーゼです。これらの酵素の相乗的な作用により、コラーゲンやその他の細胞内物質が分解されます。コラゲナーゼ酵素と中性プロテアーゼの両方の作用は、組織から細胞を効果的に放出するために必要です。様々な種類のコラーゲンが、コラゲナーゼの天然の基質です。

溶液は、TESCA緩衝液中の1～2 mg/mLでXI型から調製されます（50 mM TES、0.36 mM塩化カルシウムを含む、37°CでpH 7.4）。

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

供給時点でのこの製品は-20°Cで1年間安定です。37°C、50°Cおよび-20°Cでは、30日間でFALGPAまたはプロテアーゼ活性が減少することはありません。粗コラゲナーゼ溶液は、アリコット（10 mg/mL）で急速凍結し、-20°Cで凍結維持すれば安定です。さらに凍結・融解サイクルを繰り返すと、溶液が損傷を受けます。本製品は、氷上で保持した場合、7時間にわたって100%の活性を維持します。