キチナーゼアッセイキット

キチナーゼアッセイキットは、キチナーゼ基質の酵素的加水分解に基づいています。 加水分解によりp-ニトロフェノールが遊離されるため、これを405 nmにおいて比色分析で測定できます。

キチナーゼアッセイキットは、酵母、Metschnikowia fructicola、内部寄生菌3A12およびClostridium difficile胞子由来組換えキチナーゼのキチナーゼ活性スクリーニングに使用されています。

このキットには、真菌および細菌増殖培地、マクロファージライセートおよび精製酵素調製物中のキチナーゼ活性を効率的に検出するために必要なすべての試薬が含まれています。さらに、このキットには、さまざまな種類のキチン分解活性の検出に使用できる次の3通りの基質が含まれています。

• 4-ニトロフェニルN,N′-ジアセチル-β-D-キトビオシド。エキソキチナーゼ活性（キトビオシダーゼ活性）に適した基質。
• 4-ニトロフェニルN-アセチル-β-D-グルコサミニド。エキソキチナーゼ活性（β-N-アセチルグルコサミニダーゼ活性）の検出に適した基質。

4-ニトロフェニルβ-D-N.N′,N′′-トリアセチルキトトリオース。エンドキチナーゼ活性の検出に適した基質。

キチナーゼは、主にキチンに存在する生体高分子のN-アセチルグルコサミンに含まれるβ-1→4-グリコシド結合を触媒的に加水分解して切断します。キチナーゼは、生物に広く分布しており、真菌、バクテリア、寄生虫、植物、および動物で見出されます。キチナーゼは、アミノ酸配列の類似性に基づいてファミリーに分類されます。

また、キチン分解酵素は、キチン基質に対する酵素作用に基づいても分類されます。エンドキチナーゼは、キチン鎖の内部点でのランダムな切断を触媒する酵素として定義されています。エキソキチナーゼは、キチンの非還元末端からアセチルキトビオースまたはN-アセチルグルコサミンを順次切り出していくのを触媒し、それぞれキトビオシダーゼ、β-N-アセチルグルコサミニダーゼと呼ばれます。

キチナーゼは、さまざまな生物でさまざまな機能を果たします。細菌では、主に栄養プロセスに関与しています。酵母やさまざまな真菌では、形態形成に関与しています。動物や植物では、キチナーゼは主に病原体の攻撃に対する防御で役割を果たします。

このアッセイキットは、酵素によるキチナーゼ基質の加水分解反応に基づいています。この加水分解によりp-ニトロフェノールが遊離し、これが塩基性pH下でイオン化することにより、405 nmで比色測定することができます。