SILu^™MAB Stable-Isotope Labeled Universal Monoclonal Antibody Standard（SILu MAB安定同位体標識ユニバーサルモノクローナル抗体スタンダード） ヒト

SILu^™Mabは、[¹³C₆, ¹⁵N₄]-アルギニンおよび[¹³C₆, ¹⁵N₂]-リシンを組み込む組み換え安定同位体標識ヒトモノクローナル抗体です。SILuMabは、CHO 細胞で発現され、モノクローナル抗体の生体分析に普遍的な内部標準として使用するように作られています。SILuMabは、Fc領域における共通の配列が候補抗体と重複しているため、汎用的に使用できます。そのため候補固有の内部標準を作成する必要がありません。SILuMabはλ型軽鎖を有するIgG1抗体ですが、他の IgGアイソタイプに共通しているペプチド配列を含んでいます。

ヒトSILu^™MAB Stable-Isotope Labeled Universal Monoclonal Antibody Standard（SILu MAB安定同位体標識ユニバーサルモノクローナル抗体標準物質）は自動化抗体デノボ塩基配列決定の比較的研究で使用されています。

ユニバーサルペプチドシークエンス位置
DTLMISR　　重鎖（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4）
FNWYVDGVEVHNAK 　　軽鎖（IgG1）
VVSVLTVLHQDWLNGK　　重鎖（IgG1、IgG3、IgG4）
NQVSLTCLVK　　重鎖（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4）
GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK　重鎖（IgG1、IgG4）
AGVETTTPSK　　軽鎖（ラムダ）
YAASSYLSLTPEQWK　　軽鎖（ラムダ）

SILuMabはMRMベースのLC-MS/MSよる複雑な生物学的基質における関連する生物学的製剤の定量化の内部標準として検証されています。

• SILuMabによって、濃縮も枯渇もなく0.1 ～1000 µg/mLで再現可能な直線が得られました。
• 同一のターゲット由来の複数のペプチド間で良好な一致が認められました。
• 標識組み込み率は質量分析によって98%超と決定されました。
• 配列包括度はペプチドマッピングによって確認しました。

凍結乾燥された粉末を含むリン酸緩衝食塩液として供給されます

0.1%ギ酸を凍結乾燥された製品の再構成に用いると、SILuMabの回収率が最大になります。再構成に他の溶媒を使用すると回収率が低下することがあります。再構成後は凍結しないでください。
手順

• バイアルを約10,000 x gで短時間遠心分離機にかけて、バイアルの底に生成物を集めます。
• 0.1%ギ酸を含む500 µLの純水をバイアルに加えます。
• バイアルを最低5回穏やかに反転させて内容物を混ぜます。
• バイアルを最低15分間室温に静置し、反転による混合を繰り返します。

SILuMabのデザインは、モノクローナル抗体の定量化およびFc-融合療法の内部標準として使用するように最適化されています。SILuMabは、候補抗体を有するFc領域の通常の配列と重複しているため、汎用的に使用できます。そのため内部標準を生産する必要がありません。

安定同位体標識アミノ酸を含む強化培地を使用して、¹³C6, ¹⁵N4 -標識アルギニンおよび¹³C6, ¹⁵N2 -標識リジンを産生します。

SILuMab 重鎖
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVASGFTLNNYDMHWVRQGIGKGLEWVSKI
GTAGDRYYAGSVKGRFTISRENAKDSLYLQMNSLRVGDAAVYYCARGAGRW
APLGAFDIWGQGTMVTVSS|ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF
PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN
HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR
TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRV
VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS
RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL
YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SILuMab 軽鎖
QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDIGGYNFVSWYQQHPGKAPKLMIY
DATKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGDYTPGV
VFGGGTKLTVL|GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTV
AWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQ
VTHEGSTVEKTVAPTECS

ターゲット重複領域には下線が引かれています

定性的
完全な重鎖および軽鎖(FASTA file)

定量的
MRM設定を提供(Skyline、xls)

パッケージサイズは、吸光係数（E^0.1%）1.4を用いてA₂₈₀によって決定されたタンパク質含有量に基づきます

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SILu is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC