トリプシン ブタ膵臓由来

トリプシンは、作用が効果的であり、異なる細胞種および血清によって引き起こされる中和に対して耐性を示すため、組織分離に適用されます。

ペプチドをトリプシンで消化する場合、トリプシン:ペプチドについて約 1:100～1:20 の比を使用してください。この製品の代表的な用途は、培養表面から接着細胞を除去することです。細胞をその基材から除去するのに必要なトリプシンの濃度は、主に細胞型および培養の時期に依存します。トリプシンはまた、細胞培養期間中に細胞を再懸濁するために、タンパク質の消化に関するプロテオミクス研究において、およびさまざまなインゲル消化において使用されています†。さらなる応用例として、膜ベースの技術により結晶化を評価すること、ならびにタンパク質のフォールディング速度および収率は動的トラップの存在により制限を受ける可能性があることを試験において明確にすることが挙げられます。

ブタ膵臓由来トリプシンは、鶏骨を消化するために使用されています。これは、黄体由来血管内皮細胞の単離にも使用されています。

トリプシンは、リシンおよびアルギニン残基の C 末端側でペプチドを開裂させます。この反応の加水分解速度は、酸性残基が切断部位のいずれかの側にある場合に低速化し、また加水分解は、プロリン残基が切断部位のカルボキシル側にある場合には停止します。トリプシン活性の至適 pH は 7～9 です。トリプシンは、アミノ酸の合成誘導体のエステル結合およびアミド結合を開裂させるように作用することも可能です。トリプシンが作用するペプチド結合を覆い隠すカルシウムおよびマグネシウムイオンを中和するキレート剤として、EDTA がトリプシン溶液に添加されます。これらのイオンを除去すると酵素活性が上昇します。

DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF、およびアプロチニン等を含むセリンプロテアーゼ阻害剤がトリプシンを阻害します。

本製品はハンクス平衡塩溶液に25 mg/mLで溶解する凍結乾燥粉末です。
EDTAを必要とする用途の場合、Ca²⁺とMg²⁺のいずれも含有しない緩衝塩溶液でトリプシンを可溶化してください。

1BAEE ユニットは、BAEE を基質として用いた場合、25°C、pH 7.6 で 1 分当たり 0.001 のΔA₂₅₃ を生成します。1BTEE ユニット = 320ATEE ユニット。反応容積 = 3.2 mL（光路長 1 cm）。

トリプシンは、Lys-IIeペプチド結合で開裂するトリプシノーゲンからN-末端ヘキサペプチドを除去して作られる223個のアミノ酸残基を有する一本鎖のポリペプチドから成ります。このアミノ酸配列は6個のジスルフィド結合で架橋されています。これは天然型のトリプシンであるβ-トリプシンです。β-トリプシンは自己消化して、Lys-Ser残基で開裂し、α-トリプシンを産生します。トリプシンはセリンプロテアーゼファミリーのメンバーです。

1mM HCl溶液はアリコートで-20℃で保存して1年間安定です。Ca2⁺が存在する場合もトリプシンの自己消化が減少し、その溶液中での安定性が維持されるものと予想されます。トリプシンは、2.0 M 尿素、2.0 M グアニジンHCl塩、または0.1%（w/v）のSDS中でも活性を保持します。