FastStart TaqMan^®プローブマスター

FastStart TaqMan^® Probe Master は、LightCycle^® 装置以外のリアルタイム PCR システムでの定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）および逆転写（RT）-qPCR 用の、ROX なしでそのまま使用できるホットスタート反応混合物です。これはすべての試薬（プライマー、プローブ、およびテンプレートを除く）を含む2倍濃縮マスターミックスです。このマスターミックスを使用すると、DNAの検出と分析のための反応の準備が簡素化されます。これにより、限定したDNA配列の非常に高感度な検出と定量が可能になります。
また、ホットスタートプロトコルを使用すれば、PCRの特異性と収率が大幅に向上することも示されています。FastStart Taq DNAポリメラーゼの一部のアミノ酸残基には熱不安定性のブロック基があり、室温ではこれが酵素を修飾して不活化します。したがって、プライマーが非特異的に結合できる間は、伸長が生じません。FastStart Taq DNAポリメラーゼは、高温でブロック基を除去することにより（すなわち、+95°Cにおけるプレインキュベーション段階）活性化されます。
FastStart TaqMan^® Probe Masterは、GCリッチまたはATリッチなものを含むあらゆるDNAまたはcDNA標的の増幅および検出に使用できます。しかし、使用する特定のリアルタイムPCR機器の反応条件に検出プロトコルを適応させ、各標的向けの特異的な加水分解プローブとPCRプライマーをデザインする必要があるでしょう。
このマスターミックスとTranscriptor First Strand cDNA Synthesis Kitを組み合わせることで、2段階qRT-PCRで優れた結果を得ることができます。

ホットスタートプロトコールは、PCRの特異性、感度、および収量を大幅に改善することが示されています。FastStart Taq DNAポリメラーゼの一部のアミノ酸残基には熱不安定性のブロッキング基があり、室温ではこれが修飾酵素を不活性にします。したがって、プライマーが非特異的に結合できる期間中に延長は生じません。FastStart Taq DNAポリメラーゼは、高温でブロッキング基を除去（+95°Cでのプレインキュベーションステップ）すると活性化されます。

FastStart TaqMan^® Probe Masterは以下の用途に使用されています。

• 定量的でリアルタイムのDNA検出アッセイ
• qPCRおよび2段階逆転写(RT)-qPCR
• 加水分解プローブ検出フォーマットに

• qPCRの感度と特異性を高めます。

マスターミックスに含まれるホットスタート酵素FastStart Taq DNAポリメラーゼと最高純度のヌクレオチドを使用して、低いサイクル閾値（C_t）を生成します。

• プローブベースのアッセイと併用します。

Universal ProbeLibraryプローブまたはその他の加水分解プローブを使用したアッセイで、高感度かつ特異的な結果を達成します。

• 広範なDNAまたはcDNAターゲットを増幅および検出します。

GCリッチまたはATリッチな断片を含む、最大500 bpの長さの断片を増幅します。

• LightCycler^®機器以外のあらゆるリアルタイムqPCR機器でご使用ください。

ROX参照色素を含むものとROXを含まないものの2つのフォーミュレーションから選択します。

• アガロースゲルで増幅生成物を視覚化します。

• ロボットピペッティングステーションを使用してqPCR反応をセットアップします。

長時間の反応セットアップ時間中、室温で安定したマスターミックスから得られる利点。

• 持ち越し汚染の防止：

ミックスにはdUTPが含まれているため、ウラシル-DNAグリコシラーゼと併用して持ち越し汚染（増幅されたDNAの混入）から生じる偽陽性を防ぐことができます。

機能検査：各ロットを次の3つのテンプレートを使用して各ロットのqPCRにおける性能を検査します。GCリッチテンプレート、ATリッチテンプレート、長いテンプレート（約440 bp）。

qPCRターゲット
原則として、FastStart TaqMan^® Probe Masterは、GCリッチまたはATリッチなものを含む、あらゆるDNAまたはcDNAターゲットの増幅と検出に使用できます。ただし、各ターゲットには以下が必要です。

• 検出プロトコールをリアルタイムPCR機器の反応条件に適合させること、および
• ターゲット固有のPCRプライマーと加水分解プローブを設計すること。

一般的な推奨事項については、リアルタイムPCR装置の取扱説明書を参照してください。
2種類のフォームが利用可能です。
マスターミックスは、ROX参照色素を含むものとROXを含まないものの2種類のフォームが利用可能です。
持ち越し汚染の防止。
このマスターにはdUTPが含まれています。dUTPはPCR製品に組み込まれ、持ち越し汚染に起因する擬陽性を防ぐのに役立ちます。その後のPCRでウラシルDNAグリコシラーゼを追加し、ウラシルを含む持ち越し汚染物質（以前のPCRでの増幅生成物）を分解できます。
qRT-PCR
このマスターミックスを弊社の2ステップqRT-PCR用Transcriptor First Strand cDNA合成キットと組み合わせます。このキットは優れた結果を提供し、すべてのリアルタイムPCR機器で効率的に動作します。

FastStart TaqMan^® Probe Masterは、FastStart Taq DNAポリメラーゼ、反応緩衝液およびヌクレオチド（dATP、dCTP、dGTP、dUTP）を含む2倍濃縮のマスターミックスです。

生命科学研究専用です。診断手順には使用しません。

LightCycler is a registered trademark of Roche

TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.