Benzonase^® Nuclease HC

La nucleasa Benzonase^® es una endonucleasa genotecnológica procedente de Serratia marcescens. Degrada todas las formas de ADN y ARN (monocatenarias, bicatenarias, lineales y circulares) pero no tiene actividad proteolítica. Es eficaz en muchas condiciones diversas y posee una actividad específica excepcionalmente elevada. La enzima digiere por completo los ácidos nucleicos a oligonucleótidos de 2 a 5 bases de longitud (por debajo del límite de hibridación) terminados en 5′-monofosfato, lo que es ideal para separar los ácidos nucleicos de las proteínas recombinantes y permite el cumplimiento de las directrices de la FDA sobre contaminación con ácidos nucleicos. La capacidad de Benzonase para hidrolizar rápidamente los ácidos nucleicos hace de la enzima una opción excelente para reducir la viscosidad y el tiempo de procesamiento, y para aumentar el rendimiento proteico. Por ejemplo, la enzima es compatible con los reactivos de extracción de proteínas BugBuster^® y PopCulture^® y, por tanto, puede agregarse junto con esos reactivos para eliminar la viscosidad y los ácidos nucleicos de los extractos de E. coli.

La enzima consiste en dos subunidades de 30 kDa cada una. Es funcional a un pH comprendido entre 6 y 10 y de 0 a 42°C; además requiere Mg²⁺ 1-2 mM para activación. La enzima es también activa en presencia de detergentes iónicos y no iónicos, agentes reductores, PMSF (1 mM), EDTA (1 mM) y urea (su actividad relativa depende de las condiciones específicas). Los cationes monovalentes > 150 mM, el fosfato > 100 mM, el sulfato de amonio > 100 mM o el HCl de guanidina > 100 mM inhiben su actividad.

La nucleasa Benzonase está disponible en calidades ultrapura (> 99 % por SDS-PAGE) y pura (> 90 %) a una concentración estándar de 25-29 U/μl y a una concentración elevada (HC) de 250 U/μl. Ambas preparaciones están exentas de proteasas detectables y tienen una actividad específica > 1 x 10⁶ U/mg de proteínas. El grado de pureza de > 99 % se prueba para endotoxinas y contiene < 0,25 UE/1000 unidades. El producto se suministra como una disolución filtrada a través de 0,2 μm en glicerol al 50 %. Almacenar a una temperatura de -20°C.

Endotoxinas totales: < 0.25 EU/1,000 units. Purity : > un 90% mediante SDS-PAGE.

Utilizado para eliminación de los ácidos nucleicos de las muestras proteicas.

Digiere el ADN y el ARN nativos o desnaturalizados por calor.

Una unidad se define como la cantidad de enzima que causa un A²⁶⁰ de 1,0 en 30 minutos, lo que corresponde a la digestión completa de 37 μg de ADN.

BUGBUSTER is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

POPCULTURE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

La nucleasa Benzonase^® es una endonucleasa genotecnológica procedente de Serratia marcescens. Degrada todas las formas de ADN y ARN (monocatenarias, bicatenarias, lineales y circulares) pero no tiene actividad proteolítica. Es eficaz en una amplia variedad de condiciones y posee una actividad específica excepcionalmente elevada. La enzima digiere por completo los ácidos nucleicos a oligonucleótidos de 2 a 5 bases de longitud (por debajo del límite de hibridación) terminados en 5′-monofosfato, lo que es ideal para separar los ácidos nucleicos de las proteínas recombinantes y permite el cumplimiento de las directrices de la FDA sobre contaminación con ácidos nucleicos. La capacidad de la Benzonase para hidrolizar rápidamente los ácidos nucleicos hace de la enzima una opción excelente para reducir la viscosidad y el tiempo de procesamiento, y para aumentar el rendimiento proteico. Por ejemplo, la enzima es compatible con los reactivos de extracción de proteínas BugBuster y PopCulture y puede por tanto añadirse junto con esos reactivos para eliminar la viscosidad y los ácidos nucleicos de los extractos de E. coli.

La enzima consta de dos subunidades de 30 kDa cada una. Es funcional a un pH comprendido entre 6 y 10, y de 0 a 42°C; además, requiere Mg²⁺ 1-2 mM para su activación. La enzima es también activa en presencia de detergentes iónicos y no iónicos, agentes reductores, PMSF (1mM), EDTA (1 mM) y urea (su actividad relativa depende de las condiciones específicas). Su actividad es inhibida por cationes monovalentes > 150 mM, fosfato > 100 mM, sulfato de amonio > 100 mM o HCl de guanidina >100 mM.

La nucleasa Benzonase está disponible en calidades ultrapura (>99 % mediante SDS-PAGE) y pura (>90 %) a una concentración estándar de 25 - 29 U/µl y a una concentración elevada (HC) de 250 U/µl. Ambas preparaciones están exentas de proteasas detectables y tienen una actividad específica > 1 × 10⁶ U/mg de proteínas. El grado de pureza >99 % se ha probado para endotoxinas y contiene <0.25 EU/1000 units. The product is supplied as a 0.2 µm filtered solution in 50% glycerol. Store at -20°C.

Total endotoxin:<0.25 EU/1,000 units.Purity: >90 % mediante SDS-PAGE.