Anticuerpo anti-híbrido DN-ARN, clon S9.6

Heteropolímero ADN-ARN dúplex preparado por transcripción del ADN monocatenario de phi X174 con ARN polimerasa dependiente de ADN (Boguslawski, S.J., et al. (1986). J. Immunol Methods. 89(1):123-130).

Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear

El anti-híbrido ADN-ARN, clon S9.6, Nº de Ref. MABE1095, es un anticuerpo monoclonal de ratón muy específico, que se dirige al híbrido ADN-ARN y se ha probado en ensayo de unión por afinidad, inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), ChIP-seq, inmunotransferencia por puntos, inmunocitoquímica e inmunoprecipitación.

Análisis mediante inmunotransferencia por puntos: 0,2 µg/ml de un lote representativo detectó un mayor nivel de híbridos ADN-ARN en extractos genómicos de la cepa de levadura con deficiencia de RNasa H que en extractos de la cepa natural (Cortesía de Lorenzo Costantino, Ph.D., Koshland Lab, University of California at Berkley, EE.UU.).

Ensayo de unión por afinidad: El clon S9.6 se unió al heteropolímero ADN-ARN y el poli(I)-poli(dC) por igual, pero se requirieron niveles 100 veces superiores de poli(A)-poli(dT) para lograr un grado similar de unión. El clon S9.6 no se unió al ADN monocatenario, el ADN bicatenario, el ARN, y el ARN ribosómico (Boguslawski, S.J., et al. (1986). J. Immunol Methods. 89(1):123-130).

Análisis de inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP): un lote representativo detectó un aumento de los híbridos de ARN-ADN en cuatro genes transcritos activamente tras desactivación mediada por shRNA de BRCA1 o BRCA2, pero no de PCID2 ni de RAD51, en las células HeLa (Bhatia, V., et al. (2014). Nature. 511(7509):362-365.).

Análisis de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP): un lote representativo detectó bucles R formados sobre el gen beta-actina utilizando una preparación de la cromatina HeLa. El tratamiento con RNasa H de la preparación de cromatina evitó que el clon S9.6 inmunoprecipitara fragmentos de la cromatina diana (Skourti-Stathaki, K., et al. (2011). Mol. Celda. 42(6):794-805).

Análisis de inmunoprecipitación-secuenciación de cromatina (ChIP-seq): un lote representativo detectó una distribución genómica de híbridos de ADN-ARN en brotes de levadura mediante análisis de ChHIP-seq (El Hage, A., et al. (2014). PLoS Genet. 10(10):e1004716).

Análisis mediante inmunocitoquímica: lotes representativos inmunolocalizaron los bucles R nucleares mediante tinción inmunocitoquímica fluorescente de células madre embrionarias humanas H1 fijadas con metanol (hESC) y células HeLa fijadas con formaldehído (Bhatia, V., et al. (2014). Nature. 511(7509):362-365; Ginno, P.A., et al. (2012). Mol Cell. 45(6):814-825).

Análisis mediante inmunoprecipitación: un lote representativo causó inmunoprecipitación del sustrato bucle R transcrito in vitro (híbrido ADN-ARN), pero no de ADN bicatenario (dsDNA) (Ginno, P.A., et al. (2012). Mol. Cell. 45(6):814-825).

El clon S9.6 se unió al heteropolímero ADN-ARN y el poli(I)-poli(dC) por igual, pero se requirieron niveles 100 veces superiores de poli(A)-poli(dT) para lograr un grado similar de unión. El clon S9.6 no se unió al ADN monocatenario, el ADN bicatenario, el ARN, y el ARN ribosómico (Boguslawski, S.J., et al. (1986). J. Immunol Methods. 89(1):123-130).

La estructura diana heterodúplex ADN-ARN (bucle R) no es específica de secuencia ni de especie.

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Concentración: Consulte la ficha técnica específica del lote.

IgG2aκ de ratón purificada en tampón que contiene Tris-glicina 0,1 M (pH 7,4), NaCl 150 mM con acida sódica al 0,05 %.

Presentación: Purificada

Proteína G purificada.

Los híbridos de ADN-ARN aparecen de forma natural dentro de las células eucariotas y su concentración es elevada en sitios de gran actividad transcripcional. Son estructuras de ácidos nucleicos no canónicos con funciones reguladoras transcripcionales. Se ha comunicado que su presencia predispone un locus a la rotura cromosómica. Un locus que forma un ADN:ARN crea una conformación intermedia A/B bicatenaria, con una segunda diana para las proteínas de unión a ácidos nucleicos monocatenarios en la cadena de ADN complementaria desplazada. Se ha demostrado que son resistentes a la actividad de las ADN metiltransferasas. La formación de híbridos ADN:ARN se ha asociado con una serie de enfermedades neurológicas. Mutaciones en la ADN:ARN helicasa senataxina (SETX) están implicadas en la forma juvenil dominante de la esclerosis lateral amiotrófica tipo 4 y una forma recesiva de la ataxia con apraxia oculomotora tipo 2.

Evaluada mediante inmunocitoquímica en células HeLa.

Análisis mediante inmunocitoquímica: una dilución 1:50 de este anticuerpo inmunolocalizó híbridos de ADN-ARN nucleares y mitocondriales en células HeLa fijadas con paraformaldehído al 4 % y permeabilizadas con Triton X-100 al 0,3 %.

Estable durante 1 año a 2-8°C desde la fecha de recepción.