ELISA para proliferación celular, BrdU (colorimétrico)

Inmunoanálisis colorimétrico para la cuantificación de la proliferación celular basado en la medición de la incorporación del BrdU durante la síntesis de ADN:  una alternativa no radioactiva al análisis de incorporación de la [³H]-timidina.

Para uso exclusivo en investigación. No indicado para procedimientos diagnósticos.
El ELISA de proliferación celular, BrdU (colorimétrico) pertenece a la segunda generación, mejorada, de kits para medir la síntesis de ADN. Es una alternativa colorimétrica sencilla, rápida y precisa para cuantificar la proliferación celular la incorporación del BrdU durante la síntesis de ADN en las células que se están replicando (durante el ciclo celular). Por tanto, el ELISA de proliferación celular puede utilizarse in vitro en muchos sistemas celulares diferentes. Por ejemplo:

• Detección y cuantificación de la proliferación celular inducida por factores de crecimiento y citocinas
• Determinación de los efectos inhibidores o estimulantes de varios compuestos sobre la proliferación celular en la investigación medioambiental y biomédica, y en las industrias farmacéutica, cosmética y alimentaria
• Medición de la inmunorreactividad de los linfocitos estimulados por mitógenos o antígenos
• Análisis de la quimiosensibilidad de las células tumorales a diferentes citostáticos en la investigación médica
• Análisis de la biocompatibilidad de varios andamios empleados en ingeniería del tejido óseo para el crecimiento de células óseas.

El conjugado de anticuerpos reacciona con el análogo de la timidina 5-bromo-2′-desoxiuridina (BrdU) y con el BrdU incorporado en el ADN. Para unirse al BrdU incorporado al ADN, el ADN marcado con BrdU tiene que desnaturalizarse. El anticuerpo no experimenta reacción cruzada con ningún componente celular endógeno, como la timidina, la uridina o el ADN.

1 kit que contiene 6 componentes.

Concentración de trabajo: El anticuerpo del kit (anti-BrdU-peroxidasa) tiene, después de su reconstitución, una concentración de 7,5 U/ml; después de dilución 0,0075 U/ml. En lugar del anticuerpo del kit, también pueden utilizarse los fragmentos Fab del anticuerpo anti-BrdU. Este anticuerpo tiene una concentración doble, de modo que habrá que diluirlo después de la reconstitución en 1 ml con 1:200.
Disolución de trabajo: Disolución de marcaje con BrDU

Diluir el reactivo de marcaje con BrdU 1:100 con medio de cultivo estéril (concentración resultante: BrdU 100 μM ).
Para una microplaca (MP) de 96 pocillos, se requiere 1 ml de la disolución de marcaje con BrdU si las células se cultivaron en 100 μl /pocillo (10 μl/pocillo) y 2 ml de la disolución de marcaje BrdU si las células se cultivaron en 200 μl/pocillo (20 μl/pocillo).

Disolución de reserva de anti-BrdU-peroxidasa

Disuelva la anti-BrdU-peroxidasa en 1,1 ml de agua bidestilada durante 10 minutos y mezcle bien.

Disolución de trabajo anti-BrdU-peroxidasa

Diluya la disolución de reserva de anti-BrdU-peroxidasa 1:100 con disolución de dilución de anticuerpos. Para un MP de 96 pocillos diluya 100 μl de la disolución de reserva de anti-BrdU-peroxidasa en 10 ml de disolución de dilución de anticuerpos

Disolución de lavado

Diluya el tampón de lavado concentrado 1:10 con agua bidestilada.
Para un MP de 96 pocillos diluya 10 ml del concentrado tampón de lavado con 90 ml de agua bidestilada.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): disolución de marcaje con BrdU
El reactivo de marcaje con BrdU no diluido (x1000): Entre 2 y 8 ºC durante varios meses protegido de la luz.
El reactivo de marcaje con BrdU diluido: Estable a 2-8 °C durante varias semanas. Conservar protegido de la luz. Para la conservación a largo plazo se recomienda guardar la disolución de marcaje con BrdU en alícuotas entre -15 y -25 °C.
Disolución de reserva de anti-BrdU-peroxidasa
Entre 2 y 8 ºC durante varios meses. Para la conservación a largo plazo se recomienda guardar la disolución en alícuotas entre -15 y -25 °C.
Disolución de trabajo anti-BrdU-peroxidasa
Preparar poco antes de usar. No guardar.
Disolución de lavado
Entre 2 y 8 °C durante varias semanas.

La disolución de trabajo del anticuerpo debe ser una disolución salina tamponada con fosfato que contenga BASA al 1 % a pH 7,4

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.