Kit de detección de muerte celular in situ, POD

Kit para la detección y la cuantificación de las células apoptóticas muertas al nivel unicelular mediante microscopia de luz en inmunohistocitoquímica.

El kit de detección de muerte celular in situ, POD,  es una técnica no radiactiva precisa, rápida y sencilla para detectar y cuantificar la muerte celular apoptótica al nivel unicelular en células y tejidos. Por tanto, el kit de detección de muerte celular in situ puede utilizarse en muchos sistemas de análisis diferentes.

• Son ejemplos: Detección de células apoptóticas individuales en cortes de tejido congelados, incluidos en parafina y fijados en formalina en investigación básica y en la anatomopatología ordinaria
• Determinación de la sensibilidad de las células cancerosas a la apoptosis inducida por fármacos en la investigación del cáncer y en oncología clínica
• Tipado de las células que experimentan muerte celular en poblaciones heterogéneas mediante procedimientos de tinción doble

El kit para detección de muerte celular in situ, POD, se basa en la detección de fragmentos de ADN monocatenario y bicatenario que aparecen en las primeras etapas de la apoptosis.
Las células apoptóticas se fijan y se permeabilizan. A continuación, las células se incuban con la mezcla de reacción TUNEL que contiene TdT y dUTP- fluoresceína. Durante este periodo de incubación, el TdT cataliza la agregación de dUTP-fluoresceína a los grupos 3′-OH libres del ADN monocatenario y bicatenario. Después de lavar, el marcaje incorporado en los sitios dañados del ADN se identifica con un conjugado de anticuerpo anti-fluoresceína con la enzima reportera peroxidasa. Después de lavar para eliminar el conjugado enzimático no unido, el POD retenido en el complejo inmunitario se visualiza mediante una reacción de sustrato.

Sensibilidad: La máxima intensidad del marcaje (tinción celular) de las células apoptóticas es mayor de la obtenida con el método de traslado de mellas.
Rapidez: El uso de fluoresceína-dUTP permite el análisis de las muestras directamente después de la reacción TUNEL, pero antes de agregar el sistema de detección secundario.
Comodidad: El procedimiento de marcaje directo utilizando dUTP-fluoresceína permite la verificación de la eficiencia de la reacción TUNEL durante el procedimiento de análisis.
Precisión: Identificación de la apoptosis a un nivel molecular (roturas en la hebra de ADN) e identificación de las células en las primerísimas etapas de la apoptosis.
Flexibilidad: Sin sustrato incluido; proporciona la oportunidad de seleccionar el procedimiento de tinción de elección.

1 kit que contiene 3 componentes.

Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): Mezcla de reacción TUNEL
La mezcla de reacción TUNEL debe prepararse inmediatamente antes de su uso y no debe guardarse. Conservar la mezcla de reacción TUNEL en hielo hasta su uso.

Conversor-peroxidasa
Una vez descongelada la disolución conversor-peroxidasa, debe conservarse entre 2 y 8 °C (estabilidad máxima, seis meses).
Nota: No congelar.

Material de muestra: Preparaciones de frotis celular y de citoespín, crecimiento de células adherentes en portaobjetos y cortes de tejido congelados e incluidos en parafina.