Detección de muerte celular ELISA^PLUS

Para uso exclusivo en investigación. No indicada para procedimientos diagnósticos.

El enzimoinmunoanálisis fotométrico ELISA^PLUS para detección de muerte celular se utiliza para la determinación cuantitativa in vitro de los fragmentos citoplasmáticos de ADN asociados a histonas (mononucleosomas y oligonucleosomas) después de la muerte celular inducida.
El kit contiene una disolución de parada que permite a los usuarios terminar la reacción del sustrato y realizar el análisis en condiciones definidas, lo que la hace adecuada para su utilización en aplicaciones de gran rendimiento.

La anti-histona reacciona con las histonas H1, H2A, H2B, H3 y H4 de varias especies (humana, ratón, rata, hámster, vaca, zarigüeya, Xenopus). El anti-ADN se une al ADN monocatenario y bicatenario. Por consiguiente, el ELISA permite la detección de mononucleosomas y oligonucleosomas de varias especies, y puede utilizarse para medir la muerte celular apoptótica en muchos sistemas celulares diferentes.

Tiempo del análisis: 3 - 4 horas
Control negativo: Dependiendo de las condiciones del cultivo celular, cada cultivo celular permanente de crecimiento exponencial contiene una cierta cantidad de células muertas (normalmente en torno al 3 - 8 %). En el inmunoanálisis, estas células muertas inherentes presentes en la muestra no tratada (sin agente inductor de muerte celular) provocarán un cierto valor de absorbancia (control negativo).
Control positivo: Un complejo ADN-histona actúa como un control positivo.
Material de muestra: Fracciones citoplasmáticas (lisados) de las líneas celulares, células ex vivo, sobrenadantes de cultivo celular y suero o plasma

Utilice este equipo para la cuantificación relativa de fragmentos de ADN en complejos con histonas (mononucleosomas y oligonucleosomas) fuera del citoplasma de las células después de la inducción de la apoptosis o cuando son liberados de las células necróticas. Dado que en el análisis no se requiere el marcaje de las células, puede detectar degradación internucleosómica del ADN genómico durante la apoptosis incluso en células que no proliferan in vitro, por ejemplo, las células tumorales recién aisladas. Los anticuerpos utilizados en el análisis no son específicos de especie, de modo que el kit puede utilizarse para analizar células de una amplia variedad de especies.

Conversión de unidades: 1 mU = 1 x 10-3 DO (1 mU = 0,001 OD).

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.

1 kit que contiene 10 componentes

Disolución de trabajo: Preparación de las disoluciones de trabajo

Además de las disoluciones listas para utilizar suministradas con este kit, tendrá que preparar las siguientes disoluciones de trabajo:
Nota: Utilice sólo agua bidestilada para la reconstitución de los liofilizados.

Biotina anti-histonas
Reconstituya el liofilizado en 450 μl de agua bidestilada durante 10 minutos y mezcle bien.
Uso: Componente del inmunorreactivo.
Anti-ADN peroxidasa
Reconstituya el liofilizado en 450 μl de agua bidestilada durante 10 minutos y mezcle bien.
Uso: Componente del inmunorreactivo.
Control positivo
Reconstituya el liofilizado en 450 μl de agua bidestilada durante 10 minutos y mezcle bien.
Uso: Paso 1 del ELISA.
Comprimidos de ABTS
Dependiendo del número de muestras que vayan a analizarse, disuelva1, 2 o 3 comprimidos de la botella 7 en 5, 10 o 15 ml de tampón del sustrato.
Uso: Paso 5 del ELISA.
Disolución de parada ABTS
Si se observa turbidez o un precipitado, caliente a 37 °C con agitación hasta que la disolución esté transparente.
Uso: Paso 6 del ELISA.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): Biotina anti-histonas: de 2 a 8 °C durante 2 meses.
Comprimidos de ABTS: 1 mes guardado protegido de la luz. Deje llegar a entre 15 y 25 °C antes de usar.
Disolución de parada ABTS: De 2 a 8 °C hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta.

El límite exacto de detección de células moribundas o muertas en una muestra concreta depende mucho de la cinética de muerte celular, el agente citotóxico utilizado y la cantidad de células afectadas en la población celular total. Utilizando U937/camptotecina (CAM) como sistema de modelo para la muerte celular, el inmunoanálisis permite la detección específica de mononucleosomas y oligonucleosomas en la fracción citoplásmica de 125 equivalentes celulares/pocillo.