培地の調整方法

このページでは各種培地の調整方法についてご紹介しています。

粉末培地の調整

最終体積の 90%の培養用水を量り取ります。（水は室温にしてください）
穏やかに撹拌しながら、粉末培地を加え、溶解するまで撹拌します。加熱はしないでください。
製品の容器を少量の水ですすぎ、残った粉末をすべて洗い出し、溶液に加えます。
調整する培地の最終体積に必要な重炭酸ナトリウムの量を下表の「重炭酸ナトリウムおよび L-グルタミン添加量表」から求め、溶液に添加し、溶解するまで撹拌します。
培地の pH は減圧ろ過中に上昇するため、撹拌中は目的の pH よりも 0.1～0.3 低い pH に調整します。その際には1 N の HClや 1 N の NaOH を用いるようにしてください。
培養用水をさらに加え、最終体積に調整します。
0.2 μm 以下のメンブレンフィルターで滅菌ろ過します。
滅菌容器に無菌的に分注し、液体培地は 2～8℃の暗所に保存します。

10 倍濃縮培地の成分の 1 部は pH 7.0 で沈殿するため、1 倍に希釈した場合に pH 7.0 にならない場合もあります。そのため、1 倍に希釈した培地の pH は滅菌した 1 N の HClや 1 N の NaOH で調節する必要があります。
希釈には滅菌容器、滅菌成分を用いてください。

7.5% 重炭酸ナトリウム溶液（製品番号：S8761）、200 mM L-グルタミン溶液（製品番号：G7513）またはL-グルタミン（製品番号：G6392）を使用する場合、1 倍（等倍濃度）液体培地に適した重炭酸ナトリウムおよびL-グルタミンの濃度は、下表のようになります。

7.5％重炭酸ナトリウム溶液（製品番号：S8761）、または粉状（製品番号：S5761）を使用する場合 1 倍粉末培地に適した重炭酸ナトリウムの量は下表のようになります。

オートクレーブができるように調整された培地です。

培地の添加物は、その物質の熱安定性に応じて加えます。つまり、耐熱性添加物はオートクレーブ前に加えることができますが、非耐熱性添加物はオートクレーブ後に無菌的に加える必要があります。培地の保存条件および期限は添加物の種類によって決まります。

最終体積の 90%の細胞培養用水を量りとります。
穏やかに撹拌しながら Auto-Mod™粉末培地を加え、溶解するまで撹拌します。
製品の容器を少量の水ですすぎ、残った粉末をすべて洗い出し、洗水を溶液に加えます
RPMI1640（製品番号：R7755）はオートクレーブ前にpH 4.0 に調整する必要があります。
細胞培養用水をさらに加え、体積を調整します。この時オートクレーブ後に加える重炭酸ナトリウム溶液と L-グルタミン溶液の体積を差し引いた体積に調整してください。
121℃、15 psi で15 分間オートクレーブを行います。（注：オートクレーブの性能にはバラつきがあります。各装置をご確認ください）
長時間の加熱および蒸発を避けるため、ただちに培地を取り出します。
培地を 15～20℃に冷却した後、調整する培地の最終体積に必要な滅菌済み 7.5%炭酸水素ナトリウム（製品番号：S8761）と、滅菌済み 200 mMのL-グルタミン溶液（製品番号：G7513）または、γ線滅菌済みL-グルタミン（製品番号：G6392）を加えます。適切な量については下表をご覧ください。
必要に応じて、無菌 1 N の NaOH または 1 NのHClでpHを調節します。
液体培地は 2～8℃の暗所に保存します。